Работа 2. Определение содержания мочевой кислоты в сыворотке крови фосфорновольфрамовым методом. Принцип метода

Мочевая кислота восстанавливает фосфорновольфрамовый реактив (реактив Фолина) с образованием комплекса голубого цвета. Интенсивность окраски раствора, фотометрируемого при красном светофильтре (590-700 нм), пропорциональна содержанию в анализируемой жидкости мочевой кислоты.

В норме содержание мочевой кислоты в сыворотке крови составляет 0,2 – 0,5 ммоль/л (0,24 – 0,5 ммоль/л – у мужчин, 0,16 – 0,4 ммоль/л – у женщин). Повышение содержания мочевой кислоты в крови (гиперурикемия) и моче наблюдается при многих патологических состояниях, связанных с усиленным распадом нуклеопротеидов (лейкозах, лучевой болезни, сахарном диабете и др.), при нарушении ее выделения из организма (заболевания почек). Резко увеличивается концентрация мочевой кислоты при подагре, это сопровождается отложением ее солей в суставах и различных тканях организма.

Снижение концентрации мочевой кислоты в сыворотке крови наблюдается после применения АКТГ, салицилатов, при анемии, миеломной болезни, ксантинурии.

Ход определения

В пробирку вносят 8,0 мл дистиллированной воды, 1,0 мл сыворотки крови, 0,5 мл 0,35М раствора H₂SO₄ и содержимое пробирки перемешивают, затем добавляют 0,5 мл 10% раствора Na₂WO₄ и после тщательного перемешивания через 5-10 мин смесь фильтруют посредством бумажного фильтра. 3,0 мл полученного фильтрата используют для анализа.

В две другие пробирки отмеривают 3,0 мл дистиллированной воды (холостая проба) и 3,0 мл стандартного раствора мочевой кислоты.

В каждую пробирку вливают 1,5 мл раствора Na₂CO₃, содержимое пробирки перемешивают и вносят в нее 1,0 мл реактива Фолина. Раствор взбалтывают. Через 30 мин измеряют его оптическую плотность в кювете с шириной слоя 10мм при длине 590 – 700 нм (красный светофильтр ФЭКа). Показатели экстинкции опытной и стандартной проб сопоставляют с оптической плотностью с холостой (контрольной) пробы.

Расчет ведут по формулам:

Мочевая кислота (мг/100мл) = ( Е_оп × С_ст×10) /Е_ст = (Е_оп×5) /Е_ст

Мочевая кислота (моль/л) = ((Е_оп× С_ст×10) /Е_ст) ×0,059 = ((Е_оп × 5) Е_ст) × 0,059, где Е_оп – экстинкция опытной пробы; Е_ст – экстинкция стандартной пробы (за вычетом оптической плотности контрольной пробы); С_ст - концетрация стандартного раствора ) ×5 мг/100 мл; 0,059 – коэффициент пересчета в единицы СИ; 10 – коэффициент пересчета на сыворотку крови.

Эталоны ответов тестового контроля

1.1. – Г

1.2. – 2

2.1. – 1-Г; 2-А; 3-Б; 4-В

2.2. – 1-А; 2-Б; 3-А; 4-Г; 5-А

3.1. – 2,4

3.2. – 1, 3

4.1. – В (+ + -)

4.2. – В (+ + -)

Эталоны ответов к ситуационным задачам

Задача 1.

Только азот амидогруппы используется в биосинтезе пуринового ядра, занимая позиции 3 и 9. Радиометка в других позициях в молекуле глутамина появиться в пуриновом основании не может:

Задача 2.

Проследите судьбу атома углерода в позиции 6. Это позволит ответить на вопрос задачи.

Занятие 37. Структура и функции нуклеиновых кислот.

Биосинтез ДНК и РНК.

Цель занятия. Закрепить представления о структуре, функциях и биосинтезе нуклеиновых кислот.

Содержание занятия:

– контроль выполнения заданий по самоподготовке;

– выполнение заданий тестового контроля;

– освоение методики выделения плазмидной ДНК из дрожжей;

– ознакомление с методами исследования ДНК: секвенирование, полимеразная цепная реакция, клонирование.

– заслушивание и обсуждение реферативных сообщений;

– контроль усвоения темы путем устного собеседования с преподавателем.

Примерные темы реферативных сообщений по УИРС:

1. Ингибиторы матричного биосинтеза.

2. Антисмысловые РНК у бактерий.