Работа 3. Количественное определение суммарных липидов в сыворотке крови. Принцип метода

Продукты распада ненасыщенных липидов образуют с реактивом, состоящим из серной, ортофосфорной кислот и ванилина, соединение, интенсивность окраски которого пропорциональна содержанию общих липидов в сыворотке крови. Определение содержания липидов в сыворотке крови проводится для изучения состояния липидного обмена в организме. Нормальное содержание общих липидов в сыворотке крови (нормолипемия) колеблется от 4,0-8,0 г/л. При физиологических условиях увеличение содержания липидов в крови (гиперлипемия) наблюдается через 1-4 часа после принятия богатой жирами пищи. Натощак уровень общих липидов снижается (гиполипемия). Гиперлипемия проявляется при многих патологических состояниях: у больных сахарным диабетом отмечается резко выраженная гиперлипемия (до 20,0 г/л), при заболеваниях почек (липоидном нефрозе), при поражении печени (циррозе печени и остром гепатите), при ожирении, при врожденной гиперлипемии, атеросклерозе и у лиц, злоупотреблении алкоголем.

Ход работы

В две пробирки (опытная и контрольная) наливают соответственно 0,1 мл сыворотки крови и 0,2 мл воды. В опытную пробирку вносят 2,9 мл, в контрольную 5,8 мл концентрированной серной кислоты (ОСТОРОЖНО!). Содержимое обеих пробирок тщательно перемешивают и помещают в кипящую водяную баню на 10 минут (при нагревании обращаться с пробирками осторожно). После нагревания обе пробирки вынимают и быстро охлаждают под струей холодной воды до комнатной температуры. Затем отбирают из опытной – 0,2 мл, а из контрольной – 0,4 мл охлажденного раствора и переносят его в чистые пробирки, в которых предварительно налито в опытную пробирку 3 мл, а в контрольную пробирку – 6 мл фосфорнованилинового реактива (наслаивать осторожно). После тщательного перемешивания пробы оставляют на 45 мин. в темноте при комнатной температуре. После развития окраски оптическую плотность опытного раствора (А) против контроля измеряют на ФЭКе при длине волны в 530 нм светофильтр зеленый с кюветой 5мм.

Расчёт содержания общих липидов в сыворотке крови проводят по калибровочному графику по формуле:

Х(г/л)=А×10000×3 / 0,2×1000

Эталоны ответов к тестовым заданиям

1.1. – В

1.2. – Б

2.1. – 1. Б,Д; 2. Е, 3 А,В

2.2. – 1. В; 2. Б;Г; 3.В.; 4. Б; 5. Г; 6. Д,А

3.1. – 1, 3

3.2. – 1, 2, 3

4.1. – Д (- + -)

4.2. – А (+ + +)

Эталоны ответов к ситуационным задачам

Задача 1.

Панкреатическая липаза активна в пределах рН от 6-8. Бикарбонаты способствуют нейтрализации кислотной пищевой кашицы, поступающей из желудка в тонкий кишечник. Кроме того, смещение рН в щелочную сторону способствует ионизации желчных кислот, а следовательно усиливает их амфифильность и эмульгирующие свойства.Недостаточность бикарбонатов приводит к снижению расщепления жира.

Задача 2.

В плазме крови испытуемого А наиболее значительно будет увеличено содержание ЛПОНП – частиц, ответственных за транспорт эндогенных, т.е. синтезированных in vivo липидов (главным образом триацилглицеринов) из печени в периферические ткани.

Строение липопротеиновой частицы плазмы крови:

Большая доза принятых углеводов (почти соответствующая суточной потребности – 400 г) будет активно включаться в липогенез. Образующиеся в ткани печени триглицериды разносятся в эктрагепатические ткани в составе ЛПОНП. В плазме крови испытуемого Б будет так же увеличена концентрация ЛПОНП (по тем же причинам), а также концентрация хиломикронов, т.к. последние ответственны за транспорт экзогенных, т.е. принятых с пищей триглицеридов. Функция плазменных липопротеинов – транспорт гидрофобных липидов в гидрофильной среде плазмы крови.