Работа 2. Качественное определение 17-кетостероидов в моче.

17-кетостероиды имеют кетонную группу у 17-го углероидного атома, как например, андростерон, фолликулин и др. Частично они образуются из стероидов, имеющих в 17-м положении ОН-группу, как например, кортизол, кортизон.

Качественная реакция на 17-кетестероиды проводится с м-динитробензолом. В результате образуется продукт конденсации вишнево-красного цвета. Эта реакция используется и для количественного определения 17-кетостероидов в моче.

Ход работы

В пробирку прилить 5 капель мочи, 5 капель раствора едкого натра (300г/л), 5 капель раствора м-динитробензола (20г/л) в 96% этиловом спирте, перемешать. Через 2-3 мин. появляется вишнево-красное окрашивание, характерное для 17-кетостероидов,

Работа 3. Количественное определение 17-кетостероидов в моче.

Принцип метода

При взаимодействии 17-кетостероидов с мета-динитробензолом образуются хромогены вишнево-красного окрашивания.

Ход работы

В 2 пробирки (опыт и контроль) приливают по 10 мл мочи, по 3 мл 6 н соляной кислоты и по 0,5 мл ледяной (концентрированной) уксусной кислоты. Смесь взбалтывают и пробирки ставят в кипящую водяную баню на 15 мин. Затем пробирки охлаждают и добавляют по 10 мл этилового эфира, тщательно перемешивают и верхнюю фазу (эфирный экстракт) отсасывают в центрифужные пробирки (опыт и контроль), выпаривают эфирный экстракт досуха в водяной бане при температуре 70-80° С. В обе пробы приливают по 0,2 мл этилового спирта и по 0,2 мл 3 н едкого кали. В опытную пробу добавляют 0,2 мл 2% раствора мета-динитробензола. Обе пробирки ставят в темное место на 1 час для появления окраски. Затем в пробы добавляют по 4 мл этилового спирта и колориметрируют в кюветах на 10 мм с зеленым светофильтром, опыт против контроля.

Количество 17-кетостероидов в 10 мл находят по калибровочному графику, построенному с 50 и 100 мкг андростерона.

У здорового человека экскреция 17-кетостероидов, к которым относятся кортикостероиды и мужские половые гормоны (последние входят не более 30%) составляет- у мужчин 7-23 мг/сутки и у женщин - 6-18 мг/сутки.

Различные состояния напряжения (стресс) характеризуются повышением экскреции 17-кортикостероидов до 40% и более. При раке коры надпочечников интенсивность выведения этих гормонов с мочой возрастает в 2-10 раз.

Эталоны ответов к тестовым заданиям.

1.1. – А

1.2. – Б

2.1. – 1-А, Б, В, Г; 2-А, Б, В, Г; 3-А, Б, В; 4-А

2.2. – 1-А, Г; 2-Б, Г; 3-А, В; 4-А, Г

3.1. – 1,3

3.2. – 1,2,3

4.1. – Е (- - -)

4.2. – В (+ + -)

Эталоны ответов к ситуационным задачам Задача 1.

Высокая утомляемость, частые гипогликемические состояния, повышенная пигментация кожных покровов и др. симптомы характерны для первичной хронической недостаточности коры надпочечников (болезни Аддисона).

Задача 2.

Уровень натрия и калия в крови и моче регулируется минералкортикоидами. Основным минералкортикоидом в организме человека является альдостерон. Он стимулирует реабсорбцию натрия и выведение калия.

Занятие 15. Коллоквиум по модулю «Биомембраны. Регуляторные молекулы».

Цель занятия. Закрепить знания студентов о биологической роли, структуре и механизмах действия гормонов, выявить степень усвоения студентами изучаемого материала.

Содержание занятия.

- проверка знаний на компьютере, студент должен выполнить тестовые задания по модулю.

- собеседование с преподавателем, студент должен ответить (устно) на вопросы из раздела: «Биомембраны. Регуляторные молекулы».