Работа 2. Выделение муцина слюны и определение в нем углеводного компонента.

Углевод в муцине можно обнаружить с помощью реакции Молиша. Реакция основана на дегидратации гексоз и пентоз с образованием оксиметилфурфурола и фурфурола при действии концентрированной серной кислоты, которые в присутствии серной кислоты дают с тимолом продукт конденсации красного цвета.

			+			продукт конденсации красного цвета
рибоза		фурфурол		тимол

Ход работы

В пробирку собирают около 2 мл слюны и по каплям (4-5 капель) приливают концентрированную уксусную кислоту. Выпадает осадок муцина, труднорастворимый в избытке уксусной кислоты. Жидкость из пробирки осторожно сливают. Со сгустком муцина проделывают реакцию Молиша, доказывающую присутствие в белке углеводов.

К сгустку муцина добавить 0,5-1,0 мл 1% спиртового раствора тимола. Содержание пробирки перемешать, по стенке пробирки наслоить равный объем концентрированной серной кислоты. Появляется красное окрашивание.

Работа 3. Выделение казеиногена из молока.

В молоке казеиноген содержится в виде растворимой кальциевой соли. При подкислении достигается изоэлектрическая точка, и казеиноген выпадает в осадок в свободном виде. Избыток кислоты мешает осаждению, т.к. при pH ниже изоэлектрической точки (ИЭТ казеиногена pH 4,7) молекулы белка перезаряжаются и казеиноген вновь переходит в раствор.

Ход работы

Молоко (2 мл) разбавляют равным объемом дистиллированной воды и осаждают казеиноген добавлением 2 капель 10% раствора уксусной кислоты. Казеиноген выделяется в виде хлопьевидного осадка, который отфильтровывают и промывают на фильтре дистиллированной водой (2-3 раза). Небольшие порции осадка снимают с фильтра стеклянной палочкой и употребляют для цветных реакций на белки.

Гидролиз казеина и открытие в гидролизате фосфорной кислоты:

100 мг порошка казеина растворяют в пробирке в 3 мл 10% раствора едкого натра или кали. Пробирку закрывают пробкой со стеклянной трубкой в качестве холодильника, закрепляют ее на асбестовой сетке металлической лапкой и нагревают. Через час после начала кипения жидкости гидролиз прекращают, жидкости дают остыть и нейтрализуют ее концентрированной азотной кислотой (12-15 капель) до слабокислой реакции на лакмус. При нейтрализации выпадает осадок высокомолекулярных продуктов неполного гидролиза белков (пептоны). После отстаивания жидкость фильтруют, с фильтратом проделывают молибденовую пробу на фосфорную кислоту (к 20 каплям молибденового реактива добавляют 2-3 капли гидролизата и кипятят несколько минут на голом огне). Выпадает небольшой кристаллический осадок фосфорномолибденовокислого аммония (лимонно-желтого цвета).

12(NH₄)₂·MoO₄ + H₃PO₄ + 21HNO₃ → (NH₄)₃PO₄·12MoO₃ + 21 NH₄NO₃ + 12 H₂O

желтый кристаллический осадок

Работа 4. Определение липопротеинов низкой плотности (ЛПНП)

в сыворотке крови турбидиметрическим методом.

Содержание ЛПНП (-липопротеинов) в крови колеблется в зависимости от возраста, пола и составляет в норме 3-4,5 г/л. Увеличение концентрации ЛПНП наблюдается при атеросклерозе, механической желтухе, острых гепатитах, хронических заболеваниях печени, сахарном диабете, гликогенозах, ксантоматозе и ожирении.

Принцип метода

Метод основан на способности ЛПНП образовывать с гепарином комплекс, который под действием хлорида кальция выпадает в осадок. По степени помутнения раствора судят о концентрации ЛПНП в сыворотке крови.

Ход работы

1. В пробирку вносят 2 мл раствора хлорида кальция и 0,2 мл сыворотки крови. Содержимое пробирки перемешивают.

2. Определяют оптическую плотность раствора (Е₁) против раствора хлорида кальция при красном светофильтре (630нм) в кювете на 0,5 см.

3. Раствор из кюветы переливают в пробирку, добавляют микропипеткой 0,04 мл 1% раствора гепарина и точно через 4 мин снова определяют оптическую плотность раствора (Е₂) в тех же условиях.

4. Рассчитывают концентрацию ЛПНП (с, г/л) по стандартной формуле: С = (Е₂- Е₁) х 10, где 10 – эмпирический коэффициент

Эталоны ответов к тестовым заданиям

1.1. – в

1.2. – б

2.1. – 1-б, 2-г, 3-в, 4-а

2.2. – 1-а, в; 2-е; 3-б; 4-г,д; 5-ж

3.1. – 1,3

3.2. – 1,3

4.1. – А (+ + +)

4.2. – С (+ - -)

Эталоны ответов на ситуационные задачи

Задача 1.

Метгемоглобинемия, спровоцированная приемом нитратов.

Задача 2.

Содержание урогликопротеидов в моче снижено. Наличие крови и белка в моче может указывать на воспалительный процесс в мочевыводящих путях или о мочекаменной болезни. Необходимо определить содержание мочевой кислоты в моче.