Задача 2.

В живой клетке процесс укладки синтезируемой полипептидной цепи – фолдинг регулируется особыми белками шаперонами, называемыми также белками теплового шока. Эти белки контролируют формирование стабильной и биологически активной конформации, предотвращая образование из полипептидной цепи неспецифических клубков и агрегатов, а также участвуют в доставке белков к субклеточным мишеням.

Занятие 4. Методы выделения и очистки белков.

Цель занятия. Освоить некоторые методы выделения и очистки белков, используемые для дальнейшего изучения их химического состава и строения. В результате освоения темы студент должен ознакомиться с методом электрофоретического разделения белков и научиться анализировать протеинограмму.

Содержание занятия.

– контроль выполнения заданий по самоподготовке;

– выполнение заданий тестового контроля;

– решение ситуационных задач;

– знакомство с методами электрофореза белка на бумаге,

– проведение очистки раствора белка от низкомолекулярных примесей методом диализа и гельфильтрации на молселекте;

– заслушивание и обсуждение реферативных сообщений;

– контроль усвоения темы путем устного собеседования с преподавателем.

Примерные темы реферативных сообщений по УИРС:

1. Методы определения молекулярной массы белков.

2. Электрофоретические методы разделения белков и пептидов.

Методические указания к самоподготовке

Методы препаративной химии белков основаны на их физико-химических свойствах, поэтому при подготовке к занятию следует повторить физико-химические свойства белков. Особое внимание следует уделить коллоидным свойствам белков, таким понятиям как амфотерность аминокислот и белков, зависимость электрических свойств белков от аминокислотного состава и свойствам белков в изоэлектрическом состоянии. Для лучшего усвоения материала занятия, используя учебник, лекции и дополнительную литературу, выполните следующие задания.

Вопросы и упражнения для аудиторной и внеаудиторной работы:

1. Перечислите методы фракционирования белков, позволяющие получить индивидуальный белок.

2. Кратко сформулируйте, на чем основаны перечисленные методы.

3. Выпишите способы определения молекулярной массы белков.

4. Перечислите данные, подтверждающие высокую молекулярную массу белков.

5. Дайте определение кристаллоидов и коллоидов.

6. Чем можете подтвердить способность белков образовывать коллоидные растворы?

7. Охарактеризуйте принцип метода диализа. Какое практическое значение имеет диализ?

8. Повторите механизм возникновения электрического заряда у белков. Что такое изоэлектрическая точка?

9. Охарактеризуйте явление электрофореза белков. Выпишите виды электрофореза.

10. Укажите факторы, от которых зависит скорость перемещения белковых молекул в поле постоянного электрического тока.

11. Напишите, на какие фракции разделяют белки сыворотки крови при электрофорезе на целлюлозе. Выпишите протеинограмму – соотношение белковых фракций - здоровых ребенка и взрослого человека.

12. Изучите возможности электрофоретического разделения белков на полиакриламидном геле, принцип диск-электрофореза и его значение для разделения белков сыворотки крови.

13. Выпишите классификацию методов хроматографического разделения белков по механизму разделения и технике проведения. Сформулируйте принцип метода адсорбционной, ионнообменной, афинной, и распределительной хроматографии. Кратко опишите процедуру гельфильтрации и газожидкостной хроматографии.

14. Опишите и запомните метод очистки белков от низкомолекулярных примесей методом гельфильтрации на молселекте.