Работа 2. Определение времени рекальцификации плазмы.

Для диагностики нарушений свертывания крови широко используется определение времени рекальцификации плазмы, т.е. время образования фибрина в оксалатной или цитратной плазме после добавления к ней хлористого кальция.

Ход работы

К 0,2 мл хлористого кальция в пробирке добавляют 0,1 мл физиологического раствора. Смесь выдерживают в течение 60 секунд на водяной бане при 37^оС, а затем добавляют к ней 0,1 мл испытуемой оксалатной или цитратной плазмы (1 часть консерванта на 4 части крови).

Время появления хлопьев фибрина, или сгустка, является временем рекальцификации. В норме время рекальцификации составляет 1-2 мин. Время рекальцификации по своему значению эквивалентно времени свертывания крови.

Эталоны ответов к тестовым заданиям

1.1. – 2

1.2. – 3

2.1. – 1-Б; 2-В; 3-А

2.2. – 1-Г; 2-А; 3-Б; 4-Д; 5-В

3.1. – 4

3.2. – 1,2,3

4.1. – В (++-)

4.2. – В (++-)

Эталоны тветов на ситуационные задачи

Задача 1.

В образовании фибринового тромба выделяют 4 этапа: 1 – превращение фибриногена под действием тромбина в мономер фибрина; 2 – образование нерастворимого геля фибрина; 3 – стабилизация геля фибрина путем образования амидных связей между лизином одной молекулы фибрина и глутамином другой молекулы под действием фермента трансглутамидаза – фактор XIIIa (ф.XIII активируется также под действием тромбина); 4 – ретракция (сжатие) фибринового сгустка, которая происходит под действием актомиозина тромбоцитов (сократительного белка, обладающего АТФ-азной активностью).

Протробмин, как и все другие проферменты прокоагулянтного пути содержат остатки γ-карбоксиглутаминовой кислоты, образующиеся в результате посттрансляционной модификации этих белков в эндоплазматическом ретикулуме гепатоцитов. При активации фактора происходит отщепление остатков γ-карбоксиглутаминовой кислоты.

Поэтому инактивация тромбина препятствует тромбозу, что и используется в гирудотерапии.

Задача 2.

В антикоагулянтной фазе участвуют: тромбин (IIa), тромбомодулин (Тм) – белок-активатор, протеин С – витамин К-зависимая протеаза, белок-активатор S, факторы Va и VIIIa. Протекает эта фаза следующим образом:

Мутация гена ф. V, при которой он становится резистентным к протеину С, приводит к тому, что на 3 этапе не происходит гидролиз ф.Va.

Занятие 48. Основы иммунохимии (семинар).

Цель занятия. Углубить и закрепить знания по основам гуморального и клеточного иммунитета.

Содержание занятия.

- контроль выполнения заданий по самоподготовке;

- выполнение тестовых заданий;

- решение ситуационных задач;

- заслушивание и обсуждение реферативных сообщений, подготовленных отдельными студентами;

– контроль усвоения темы путем устного собеседования с преподавателем.

Примерные темы реферативных сообщений по УИРС:

1. Система комплемента.

2. Биохимия защитных реакций микроорганизмов.

Методические указания к самоподготовке

Используя лекции и учебники, ответьте на следующие вопросы и выполните задания:

1. Дайте формулировку понятиям «иммунитет», «антиген», «антитело».

2. Перечислите неспецифические факторы защиты:

А. Клеточные:

Б. Гуморальные:

3. Перечислите факторы, обеспечиващие специфический иммунный ответ.

А. Клеточные:

Б. Гуморальные:

4. Нарисуйте схему образования В-лимфоцитов.

5. Изучите созревание Т-лимфоцитов.

На какие классы они подразделяются в зависимости от характера выполняемых функций? Кратко опишите эти функции.

6. Дайте характеристику понятию «главный комплекс гистосовместимости».

7. Изобразите схематически цепь событий, ведущих к разрушению бактерий фагоцитами

8. Охарактеризуйте кислородзависимые и кислороднезависимые бактерицидные механизмы. защиты .

9. Что понимается под термином «метаболический» или «кислородный взрыв»?

10. Под влиянием какого фермента и как происходит образование супероксиданиона и пероксида водорода в фагоцитирующей клетке? Напишите реакции.

11. Напишите реакции образования гипойодида и гипохлорида с участием Н₂О₂ и ферментов миелопероксидазы, пероксидазы эозинофилов.

12. Напишите реакцию образования NO в макрофагах.

13. Напишите реакцию образования гидроксирадикала с учатием Н₂О₂ и супероксиданиона.

14. Перечислите основные катионные белки и лизосомальные протеолитические ферменты, участвующие в микробицидном действии фагоцитов.

15. Дайте характеристику понятию «главный комплекс гистосовме-стимости».

16. Выпишите нормы содержания в крови взрослого человека основных классов иммуноглобулинов.

17. Перечислите 5 типов тяжелых (Н) и 2 типа легких (L) цепей имму-ноглобулинов.

18. Выпишите функции, выполняемые иммуноглобулинами: IgG, IgA, IgM, IgE, IgD.

19. Дайте характеристику структуры и биологической роли секреторного иммуноглобулина А.

20. Рассмотрите характер взаимодействия антиген-антитело.

21. Выпишите особенности синтеза иммуноглобулинов. Обратите внимание на механизм формирование функционально активных генов, кодирующих легкую цепь и вариабельные участки тяжелых цепей иммуноглобулинов (Ig).

22. Каким образом созревание В-клеток связано с перегруппировкой и экспрессией генов, индуцирующих легкие и тяжелые цепи иммуноглобулинов?

23. Охарактеризуйте основные функции системы комплемента.

24. Схематически представьте классический путь активации комплемента с образованием мембраноатакующего комплекса.

25. Схематически изобразите альтернативный путь активации комплемента.