Работа 4. Количественное определение билирубина в сыворотке крови по методу Иендрашека. Принцип метода

В основе метода Иендрашека лежит реакция Ван ден Берга, описавшего способность билирубина давать розово-фиолетовое окрашивание с диазореактивом Эрлиха. Интенсивность окраски прямопропорциональна концентрации билирубина в растворе.

Разрушение билирубин-альбуминового комплекса (свободный или непрямой билирубин) осуществляется кофеиновым реактивом, который одновременно переводит билирубин в растворимое диссоциированное состояние. Интенсивность образующейся окраски измеряется на ФЭК при зеленом светофильтре (563 нм), а количество билирубина определяется по калибровочному графику.

Ход работы

В 3 пробирки отмерить указанные в таблице реактивы и колориметрировать через 5-10 мин. на ФЭКе в кювете 10 мм против контроля в зеленом светофильтре.

Реактивы	Пробирки
	1-я	2-я	3-я
Сыворотка крови	1 мл	1мл	1мл
Кофеиновый реактив	3,5 мл	3,5 мл	-
Диазореактив	0,5 мл	-	0,5 мл
Физраствор	-	0,5 мл	3,5 мл
Типы билирубина	Общий	Контроль	Прямой (связанный)

По калибровочному графику определите содержание общего и связанного билирубина. Вычитая из уровня общего билирубина количество прямого (свободного), рассчитайте содержание нпрямого (свободного) билирубина.

Сопоставьте с нормой у здоровыз людей и сделайте вывод.

Эталоны ответов к тестовым заданиям

1.1. – А

1.2. – В

2.1. – 1-Г, 2-В, 3- Б, 4-А, 5-А

3.1. – все

3.2. – 1,3

4.1. – С(+ - -)

4.2. – А(+ + +)

Эталоны ответов на ситуационные задачи Задача 1.

Симптомы характерны для механической желтухи при закупорке камнем общего желчного протока. В подобных случаях в крови повышается содержание билирубина в значительной степени за счет прямого, т.к. отток желчи нарушен. Кал бесцветен, не содержит стеркобилиногена. Темный цвет мочи обусловлен проникновением в нее прямого билирубина из крови.

Задача 2.

А. Глюконеогенез.

Б. а) – лактат; б) – глицерин; в) – аминокислоты.

Занятие 47. Система гемостаза

Цель занятия. Закрепить знания по свертывающей и противосвертывающей системах крови; овладеть некоторыми из методов определения показателей гемостаза.

Содержание занятия.

- контроль выполнения заданий по самоподготовке;

- выполнение тестовых заданий;

- решение ситуационных задач;

- заслушивание и обсуждение реферативных сообщений, подготовленных отдельными студентами;

- выполнение работы по определению времени рекальцификации плазмы и времени свертывания крови;

– контроль усвоения темы путем устного собеседования с преподавателем.

Примерные темы реферативных сообщений по УИРС:

1. Биохимические основы адгезии и агрегации тромбоцитов.

2. Молекулярные механизмы противосвертывающего действия аспирина.

3. Система гепарин – антитромбины, их физиологическая роль.

4. Система фибринолиза. Механизмы регуляции.

5. Коагуляционные и анткоагулянтные факторы сосудистой стенки.