Работа 2. Определение активности альфа-амилазы в сыворотке крови амилокластическим методом. Принцип метода

Альфа-амилаза катализирует гидролиз крахмала с образованием конечных продуктов, не дающих цветной реакции с йодом. Об активности α- амилазы судят по уменьшению интенсивности окраски.

Ход работы

В обычную химическую пробирку (опыт) вносят 1 мл раствора крахмала (субстрат), прогревают 5 мин. в термостате при 37^оС, после чего к нему добавляют 0,02 мл сыворотки крови. Пробу вновь помещают на 5 мин. в термостат. Контрольную пробу проводят так же, как опытную, но сыворотку в нее не вносят. Затем и в контрольную, и опытную пробирки доливают по 1 мл рабочего раствора йода и по 18 мл дистиллированной воды, пробирки хорошо взбалтывают, их содержимое колориметрируют на ФЭКе с красным светофильтром (630-690 нм) в кювете с толщиной слоя 10 мм против дистиллированной воды.

Расчет проводят по формуле:

(Е_к - Е_оп)

Х = ――――― · 240 (г/ч·л),

Е_к

где Х - активность альфа-амилазы;

Е_к - экстинкция контрольной пробы;

Е_оп - экстинкция опытной пробы.

Активность фермента в норме составляет 16-30 г/ч л.

Работа 3. Определение щелочного резерва крови

титриметрическим методом.

Под резервной щелочностью крови понимают количество оснований крови, связанных с углекислотой. По данной методике определяется запас щелочных валентностей в цельной крови, включая и эритроциты.

Принцип метода

Заключается в связывании щелочей цельной крови соляной кислотой, избыток которой затем оттитровывают до появления в растворе мути, что соответствует изоэлектрической точке белков крови.

Ход работы

К 10 мл 0,01 н раствора соляной кислоты в стаканчике или колбочке для титрования добавляют 0,2 мл крови, тщательно перемешивают и прозрачную бурого цвета жидкость титруют из микробюретки 0,1 м раствором NaOH до помутнения и выпадения хлопьев. Обычно конец реакции наступает резко, от одной капли щелочи при рН 5,0.

Расчет производят по формуле:

(1-d) х 0,1 х 1000

щелочной запас крови = ―――――――― м-экв/л,

0,2

где, 1 – количество раствора соляной кислоты, взятого для анализа и

выраженного в миллилитрах при условии 0,1 н ее концентрации;

d – количество щелочи, израсходованное на титрование;

0,1 – нормальность щелочи;

0,2 – количество мл крови, взятой для анализа.

У здоровых людей нормальный рН крови составляет 7,36–7,42. Значения рН, вышедшие за пределы 6,8-7,8 несовместимы с жизнью.

СО₂ – связывающая способность плазмы крови у грудных детей составляет 20-24 м-экв/л, у старших детей 21-27 м-экв/л, у взрослого человека – 22-29 м-экв/л.

Эталоны ответов к тестовым заданиям

1.1. - 1

1.2. - 3

2.1. - 1-Б; 2-А; 3-В

2.2. - 1-Б; 2-В; 3-Г; 4-Д; 5-А

3.1. - Е

3.2. - Е

4.1. – В (++-)

4.2. – Е (---)

Эталоны ответов на ситуационные задачи

Задача 1.

С-реактивным называется белок, вступающий в реакцию преципитации с С-полисахаридом пневмококка. У здорового человека в крови его содержание не более 10 мг/л.