2. Визначення бгкп у молоці

До бактерій групи кишкових паличок відносять грампозитивні, що не утворюють спор, палички, які зброджують лактозу з утворенням кислоти та газу при 37ºС протягом 24 годин.

Визначення БГКП в молоці відбувається в три етапи:

1. Висів молока в елективне для кишкової палички середовище.

2. Облік бродильної проби.

3. Ідентифікація БГКП.

Висів молока в елективне для кишкової палички середовище:

1. Приготувати розведення молока 1:10. Для посіву приготувати пробірки зі стерильним середовищем Кесслер, до складу якого входять пептон (1%), лактоза (0,25%), жовч (5%). Після стерилізації та встановлення відповідного рН (7,4-7,6) додають генціан-віолет, розливають середовище у пробірки, опускають в них поплавки (маленькі пробірки) і повторно стерилізують. Готове поживне середовище має темно-фіолетовий колір, поплавки повністю заповнені середовищем).

2. У пробірки внести по 1 мл молока, розведеного 1:10.

3. Термостатувати при 37°С протягом 24 год.

Облік бродильної проби:

1. Оглянути пробірки з посівами молока на середовищі Кесслер. Відмітити наявність або відсутність бродильних пробірок (помутніння середовища, поява пухирців повітря у поплавку). При відсутності ознак бродіння продукт вважають незабрудненим кишковою паличкою.

2. При наявності ознак бродіння необхідно провести ідентифікацію культури, яка виросла, оскільки деякі види бактерій можуть визвати аналогічне бродіння. Для ідентифікації кишкової палички провести посів із бродильної пробірки на тверде елективне середовище Ендо.

3. Інкубацію посівів у термостаті проводити при 37°С протягом 24 год.

Ідентифікація кишкової палички:

1. Проаналізувати посіви культури на середовищі Ендо. Відмітити наявність або відсутність колоній, типових для кишкових паличок: бордових з металевим блиском або без нього, темно-червоних и рожевих з темним центром або прозорих незабарвлених.

2. Приготувати фіксований фарбований за Грамом препарат з бордових колоній. При виявленні грамнегативних коротких безспорових паличок дати позитивну відповідь на наявність бактерій групи кишкової палички в 0,1 мл.

Завдання:

1. Відібрати проби продуктів для дослідження.

2. Визначити загальну кількість мікроорганізмів в молоці та молочних продуктах: зробити відповідні розведення, засіяти та культивувати в термостаті при 30°С протягом 72 год.

3. Підрахувати число колоній прямим або непрямим методом та порівняти отримані результати з нормативною документацією.

4. Висіяти молоко із розведенням 1:10 на середовище Кесслер.

5. Виявити бродильні проби і висіяти їх на середовище Ендо.

6. З колоній типових для кишкових паличок зробити фіксовані фарбовані за Грамом препарати і мікроскопувати. Ідентифікувати кишкову паличку. Отримані дані порівняти з нормами в стандарті й зробити відповідний висновок (Додаток В).

Питання для самоконтролю:

1. Що є специфічною та неспецифічною мікрофлорою деяких молочних продуктів?

2. При яких умовах повинно проводитися мікробіологічне дослідження молока та молочних продуктів?

3. В чому полягає методика визначення мікробного числа продукту?

4. Надати визначення БГКП?

5. Етапи визначення БГКП в молоці.

6. Як відбувається висів молока в елективне для кишкової палички середовище?

7. Зазначте етапи обліку бродильної проби.

8. В чому полягає ідентифікація кишкової палички?