4. Практическая часть занятия. Приготовление препаратов грибов. Знакомство с особенностями их морфологии.

Цель:

-освоить на практике технику приготовления препарата «раздавленная капля»;

-освоить методику светового микроскопирования;

- на практике ознакомиться с особенностями морфологических и культуральных признаков основных групп грибов, являющихся биологическими агентами биотехнологии. (р.Mucor, р.Aspergillus, р.Penicilium, р.Candida);

- с помощью простейшего опыта выявить способность дрожжей-сахаромицетов усваивать различные субстраты.

4.1. Приготовление прижизненного препарата плесневых грибов и знакомство с их морфологией .

Оборудование и материалы: образцы культуры грибов, выросших на различных субстратах; бактериологическая петля и препаровальные иглы, микроскоп, предметные и покровные стекла, спиртовка и спички.

Ход выполнения работы

Из имеющейся культуры грибов готовят препарат "раздавленная капля", для чего препаровальными иглами осторожно берут фрагмент грибного мицелия с субстрата, стараясь не повредить гифы, и аккуратно распределяют его на предметном стекле в капле физиологического раствора или стерильной воды, накрывают покровным стеклом. Иногда более удачный препарат получается на стекле без воды. Попробуйте оба варианта.

Препарат мукора (Mucor) готовят из односуточной культуры, аспергилла (Aspergillus) и пеницилла (Penicilium) - из двухсуточной. В культуре мукора и аспергилла лучше брать серые головки, пеницилла - на границе серого и зеленого, где расположены молодые клетки. У аспергилла с серыми (но не черными) конидиями бывают хорошо видны стеригмы, похожие на лепестки подсолнуха. Препарат мукора рассматривают под малым увеличением (объектив х8),. При исследовании аспергилла сначала находят подходящий участок под малым (х8), а затем работают со средним (х40) увеличением. В такой же последовательности рассматривают и препарат пеницилла.

!!!!! Необходимо помнить, что плесневые грибы размножаются спорами. Поэтому готовить препарат надо вблизи предметного стекла, не допуская рассеивания спор. Препаровальные иглы по окончании работы тщательно прокаливают !!!!.

Задание

1. Рассмотрите внимательно внешний вид гриба Mucor. Зарисуйте внешний вид под объективом х8. Отметьте на рисунке мицелий, спорангиеносцы, спорангии со спорами. Под объективом х40 рассмотрите мицелий для выявления его септированности.

2. Рассмотрите внимательно внешний вид гриба Aspergillus, используя объектив х40. Зарисуйте внешний вид объекта, отметив на рисунке мицелий, стеригмы и конидии(экзоспоры).

3. Рассмотрите внимательно внешний вид гриба Penicilium, используя объектив х40. Зарисуйте внешний вид объекта, отметив на рисунке мицелий, конидиеносцы, стеригмы и конидии(экзоспоры).

4. Опишите внешний вид колонии рассматриваемых вами грибов. Отметьте субстрат, на котором выращена данная колония.

Внимание! Если вам не удалось приготовить препарат перечисленных в задании родов грибов, то в этом случае:

- рассмотрите готовый препарат грибов р. Mucor и отметьте все детали строения (см. задание 1);

- зарисуйте схематичное изображение грибов р. Aspergillus и Penicilium. (далее см. задания

2 и 3.

4.2. Опыт по выявлению степени доступности различных субстратов для дрожжей р. Saccharomyces cervisiae.

Оборудование и материалы: дрожжи, 3 пробирки, крахмал, глюкоза, пипетка, водяная баня, термометр, предметное и покровное стекла, бактериологическая петля, микроскоп, раствор Люголя микроскоп, часы с минутной/секундной стрелкой.

Ход выполнения работы

Цель опыта – выяснить, какой из двух субстратов (крахмал или глюкоза) является для дрожжей-сахаромицетов предпочтительнее. Для этого проводится наблюдение, в котором необходимо отметить время, через которое в клетках дрожжей начнется процесс спиртового брожения. О начале процесса судят по выделению пузырьков углекислого газа, сопровождающего этот процесс. Сравнивая интенсивность протекания брожения (или его полное отсутствие) при добавлении в среду, где находятся микроорганизмы, различных субстратов, можно сделать вывод о том, что предпочитают дрожжи. Следите за тем, чтобы:

- все компоненты (включая саму культуру дрожжей), добавляемые во все пробирки, были бы взяты в одинаковых количествах;

- все компоненты добавлялись бы одномоментно;

- все три пробирки в течение проведения опыта находились бы в одинаковых условиях.

1. Приготовить водяную баню с Т=30С.

2. В три пронумерованные пробирки поместить равное количество (порядка100 мг) обычных пекарских дрожжей.

3. Во все три пробирки добавить по 1 мл дистиллированной воды.

4. В пробирку №1 добавить 20 мг крахмала, в пробирку №2 такое же количество глюкозы. Пробирка №3 является контролем, и в нее ничего не добавляется.

5. Все три пробирки поместить в водяную баню и наблюдать за процессом, отмечая время появления первых пузырьков. Запишите, через сколько минут после начала наблюдения и в каких пробирках появились первые пузырьки.

Сделайте вывод о способности дрожжей использовать тот или иной субстрат для своей жизнедеятельности.

Объясните возможную причину предпочтительности того или иного субстрата для дрожжей-сахаромицетов.