Определение энтерококков.

Определение энтерококков проводят в случае обнаружения в партии продуктов значительного превышения количества мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов.

Методика проведения анализа. По 0,1см³ жидкого продукта засевают на поверхность молочной среды с полимиксином в 2 чашки Петри и инкубируют при 37⁰С в течение 48 часов.

При учете результатов на обеих чашках подсчитывают количество только типичных колоний энтерококков – красного цвета с зоной протеолиза на светло-голубом фоне среды. При этом среднеарифметическое число колоний умножают на 10 или 100, получая количество энтерококков в 1,0г или 1,0см³ продукта.

Одновременно 3-5 типичных колонии отсевают на скошенный мясопептонный агар для накопления чистой культуры с целью дальнейшей идентификации. После инкубации при 37⁰С в течение 24 часов из исследуемой культуры готовят мазки, окрашивают по Граму и микроскопируют.

Кроме этого, определяют каталазную активность исследуемой культуры, поскольку энтерококки перекись водорода не разлагают. Для этого культуру помещают на чистое обезжиренное предметное стекло, добавляют 1% раствор перекиси водорода и смешивают – если при смешивании пузырьки газа не выделяются, то реакция отрицательна.

Известно, что энтерококки способны к росту на средах с высоким содержанием желчи, поэтому исследуемую культуру также засевают в бульон, содержащий 40% желчь, и инкубируют при 37⁰ в течение 18-24 часов.

Возможный рост изучаемых культур в посевах на жидкой среде обязательно подтверждают микроскопией мазка и постановкой теста на каталазу. Обнаружение значительного роста энтерококков при посеве исследуемого материала свидетельствует о необходимости контроля за данным продуктом.

Определение количества дрожжей и плесневых грибов.

Метод основан на количественном подсчете колоний дрожжей и плесневых грибов, вырастающих на специальных плотных питательных средах с антибиотиками при температуре 24⁰С в течение 5 суток после посева исследуемого материала.

Из каждой пробы делают высев по 1,0см³ нативного продукта или по 1,0см³ разведений продукта 1:10 и 1:100 на две чашки Петри со средой Сабуро.

Через 15-20 минут в каждую чашку добавляют по 14,0см³ одной из агаризованных сред, охлажденных до 45-49⁰С и антибиотики. После тщательного перемешивания среды, избегая при этом образования пузырьков, и застывания агара, чашки с посевами помещают в термостат вверх дном и инкубируют при 24⁰С в течение 5 суток (120 часов) с предварительным учетом роста через 3 дня.

При учете посевов проводят подсчет соответствующих колоний на каждой чашке отдельно.

При этом колонии дрожжей и плесневых грибов разделяют визуально – по культуральным свойствам, при необходимости проводят микроскопическое исследование из колоний.

Типичные колонии плесневых грибов имеют поверхность, покрытую пушистым мицелием, похожим на вату.

Рост дрожжей сопровождается образованием крупных выпуклых блестящих серовато-белых или беловато-желтых колоний с гладкой поверхностью, ровным краем, сметанообразной консистенцией. Кроме того, по мере роста и увеличения размеров колонии дрожжей могут приобретать перламутровый оттенок и куполообразное возвышение.

Для количественного учета результатов посевов путем подсчета выросших колоний (КОЕ) отбирают те чашки, на которых выросло от 5 до 150 колоний дрожжей и (или) от 5 до 50 колоний плесневых грибов.