6. Методы изучения морфологии микроорганизмов

6.4. Окраска по Цилю-Нильсену

Окраска по Цилю-Нильсену используется в бактериологии для выявления эндоспор и для индикации микобактерий. В осуществлении этого метода также можно выделить четыре этапа.

А. На первом этапе на фиксированный мазок помещается фильтровальная бумага, на которую наливается фуксин Циля. Фуксин Циля отличается от водного фуксина («фуксина Пфейффера») более высокой концентрацией и наличием карболовой кислоты, вследствие чего для его обозначения используется также термин «карболовый фуксин». После чего предметное стекло с мазком нагревается над пламенем горелки.

1. Окрашивание продолжается примерно 5 минут, но, как правило, продолжительность этого этапа определяется «отхождением трех паров»: стекло держат над пламенем до появления парения, после чего отводят в сторону и ждут прекращения парения – и так три раза.

2. Мазок на этом этапе окрашивается в красный цвет. Споры и микобактерии обычными методами окрасить нельзя – вследствие особенностей своего химического состава они не воспринимают анилиновые красители при обычном режиме окраски. Чтобы их окрасить, используется сочетанное действие трех факторов: повышенная концентрация краски, обработка кислотой и повышенная температура (так называемое «термокислотное протравливание»).

Б. На втором этапе мазок обязательно нужно выдержать некоторое время на воздухе для охлаждения, иначе стекло на следующем этапе может лопнуть.

В. На третьем этапе мазок обесцвечивается кислотой. Обычно используется серная кислота – 1% для окраски спор и 5% для окраски микобактерий.

1. Обесцвечивание продолжается от 2 до 5 секунд с последующим обильным промыванием водой.

2. Споры и клетки микобактерий не обесцвечиваются (свойство кислотоустойчивости) и остаются красными. Все остальное – обесцвечивается.

Г. На четвертом этапе мазок окрашивается метиленовой синькой.

1. Окраска продолжается 3 – 5 минут. При этом лучше этот этап продлить подольше по той же причине, что и последний этап окраски по Граму.

2. Споры и микобактерии эту краску не воспримут и останутся красными, а вегетативная часть клетки и все бактерии, за исключением микобактерий окрасятся в синий цвет (Рис. 6-10 – 6.11).

Рис. 6-10. Бациллы, содержащие споры, окрашенные по Цилю-Нильсену

Рис. 6-11. Микобактерии в мокроте больного туберкулёзом, окрашенные по Цилю-Нильсену

3Г. Тестовые вопросы по теме занятия

Структурированный слизистый слой, покрывающий клеточную стенку:

-макрокапсула

микрокапсула

спора

Фибриллы, тесно прилегающие к клеточной стенке:

макрокапсула

-микрокапсула

спора

Выявляется в мазке из патологического материала, как неокрашенный ореол вокруг микробной клетки:

-макрокапсула

микрокапсула

спора

Защищает микроорганизм от фагоцитов и антител:

-макрокапсула

-микрокапсула

спора

Бактерия с одним жгутиком:

-монотрих

лофотрих

перитрих

амфитрих

атрих

Бактерия с пучком жгутиков:

монотрих

-лофотрих

перитрих

амфитрих

атрих

Жгутики покрывают всё тело бактерии:

монотрих

лофотрих

-перитрих

амфитрих

атрих

Защищает бактериальную клетку от неблагоприятных физико-химических условий внешней среды:

макрокапсула

микрокапсула

-спора

Спора не превышает диаметр бактериальной клетки:

-бациллы

клостридии

клебсиеллы

Спора превышает диаметр бактериальной клетки:

бациллы

-клостридии

клебсиеллы

У каких бактерий спора является защитным приспособлением, а не служит для размножения:

-бациллы

-клостридии

клебсиеллы

стрептомицеты

У каких бактерий спора не является защитным приспособлением, а служит для размножения:

бациллы

клостридии

клебсиеллы

-стрептомицеты

Особый пептидогликан оболочки споры:

-кортекс

кортес

флагеллин

мицелий

Образуется при прорастании споры:

проспора

кортекс

-ростовая трубка

гифа

Ветвящиеся палочки:

-актиномицеты рода Actinomyces

-актиномицеты рода Streptomyces

трепонемы

лептоспиры

боррелии

риккетсии

хламидии

микоплазмы

Извитые формы бактерий:

актиномицеты рода Actinomyces

актиномицеты рода Streptomyces

-трепонемы

-лептоспиры

-боррелии

риккетсии

хламидии

микоплазмы

Облигатные внутриклеточные паразиты:

актиномицеты рода Actinomyces

актиномицеты рода Streptomyces

трепонемы

лептоспиры

боррелии

-риккетсии

-хламидии

микоплазмы

Слабоветвящиеся палочки с колбовидными утолщениями на концах:

-актиномицеты рода Actinomyces

актиномицеты рода Streptomyces

трепонемы

лептоспиры

боррелии

риккетсии

хламидии

микоплазмы

Сильноветвящиеся нити:

актиномицеты рода Actinomyces

-актиномицеты рода Streptomyces

трепонемы

лептоспиры

боррелии

риккетсии

хламидии

микоплазмы

Вызывают актиномикоз:

-актиномицеты рода Actinomyces

актиномицеты рода Streptomyces

трепонемы

лептоспиры

боррелии

риккетсии

хламидии

микоплазмы

Медицинское значение этих бактерий заключается в том, что они являются продуцентами антибиотиков:

актиномицеты рода Actinomyces

-актиномицеты рода Streptomyces

трепонемы

лептоспиры

боррелии

риккетсии

хламидии

микоплазмы

Отличаются от других бактерий химическим строением пептидогликана:

-актиномицеты рода Actinomyces

-актиномицеты рода Streptomyces

трепонемы

лептоспиры

боррелии

риккетсии

хламидии

микоплазмы

Имеют 8-12 завитков одинаковой амплитуды:

актиномицеты рода Actinomyces

актиномицеты рода Streptomyces

-трепонемы

лептоспиры

боррелии

риккетсии

хламидии

микоплазмы

Первичные завитки практически не видны, а вторичные направлены в одну, подобно букве С, или разные, подобно букве S, стороны:

актиномицеты рода Actinomyces

актиномицеты рода Streptomyces

трепонемы

-лептоспиры

боррелии

риккетсии

хламидии

микоплазмы

Количество и форма завитков не постоянны:

актиномицеты рода Actinomyces

актиномицеты рода Streptomyces

трепонемы

лептоспиры

-боррелии

риккетсии

хламидии

микоплазмы

По Романовскому-Гимзе окрашиваются в розовый цвет:

-трепонемы

лептоспиры

боррелии

По Романовскому-Гимзе окрашиваются в красный (не в розовый) цвет:

трепонемы

-лептоспиры

боррелии

По Романовскому-Гимзе окрашиваются в синий цвет:

трепонемы

лептоспиры

-боррелии

Для обнаружения этих бактерий преимущественно используется тёмнопольная микроскопия неокрашенных и нефиксированных мазков:

актиномицеты рода Actinomyces

актиномицеты рода Streptomyces

-трепонемы

-лептоспиры

боррелии

риккетсии

хламидии

микоплазмы

Для обнаружения этих бактерий используется окраска по Здрадовскому:

актиномицеты рода Actinomyces

актиномицеты рода Streptomyces

трепонемы

лептоспиры

боррелии

-риккетсии

хламидии

микоплазмы

Окрашиваются по Здрадовскому в красный цвет:

актиномицеты рода Actinomyces

актиномицеты рода Streptomyces

трепонемы

лептоспиры

боррелии

-риккетсии

хламидии

микоплазмы

Формируют цитоплазматические включения:

актиномицеты рода Actinomyces

актиномицеты рода Streptomyces

трепонемы

лептоспиры

боррелии

риккетсии

-хламидии

микоплазмы

Резко отличаются от других прокариот:

актиномицеты рода Actinomyces

актиномицеты рода Streptomyces

трепонемы

лептоспиры

боррелии

риккетсии

хламидии

-микоплазмы

Не имеют клеточной стенки:

актиномицеты рода Actinomyces

актиномицеты рода Streptomyces

трепонемы

лептоспиры

боррелии

риккетсии

хламидии

-микоплазмы

Не имеют определённой формы и размера:

актиномицеты рода Actinomyces

актиномицеты рода Streptomyces

трепонемы

лептоспиры

боррелии

риккетсии

хламидии

-микоплазмы

Цитоплазматическая мембрана этих бактерий содержит в своём составе стерины:

актиномицеты рода Actinomyces

актиномицеты рода Streptomyces

трепонемы

лептоспиры

боррелии

риккетсии

хламидии

-микоплазмы

Резко отличаются от остальных прокариот по структуре ДНК:

актиномицеты рода Actinomyces

актиномицеты рода Streptomyces

трепонемы

лептоспиры

боррелии

риккетсии

хламидии

-микоплазмы

Эукариоты:

актиномицеты

спирохеты

риккетсии

хламидии

-грибы

Mycota:

актиномицеты

спирохеты

риккетсии

хламидии

-грибы

Отдельный таксон, в который выделены грибы:

Actinomyces

Streptomyces

-Mycota

Eumycota

Mycoplasma

Myxomycota

Грибы-слизневики:

Actinomyces

Streptomyces

Mycota

Eumycota

Mycoplasma

-Myxomycota

Настоящие грибы:

Actinomyces

Streptomyces

Mycota

-Eumycota

Mycoplasma

Myxomycota

Размножаются с помощью полового процесса:

-совершенные грибы

несовершенные грибы

высшие грибы

низшие грибы

Не имеют полового процесса, а размножаются вегетативно или с помощью спор:

совершенные грибы

-несовершенные грибы

высшие грибы

низшие грибы

Обладают септированным мицелием:

совершенные грибы

несовершенные грибы

-высшие грибы

низшие грибы

Обладают несептированным мицелием:

совершенные грибы

несовершенные грибы

высшие грибы

-низшие грибы

Включают в себя большинство патогенных грибов:

хитридиомицеты

гифохитридиомицеты

оомицеты

зигомицеты

аскомицеты

базидиомицеты

-дейтеромицеты

Сборная группа разных видов грибов, не имеющих полового процесса и размножающихся вегетативно или с помощью спор:

хитридиомицеты

гифохитридиомицеты

оомицеты

зигомицеты

аскомицеты

базидиомицеты

-дейтеромицеты

Плесени размножаются:

-спорами

почкованием

бинарным делением

Большинство видов дрожжей размножаются:

спорами

-почкованием

бинарным делением

По какому признаку истинные грибы отличаются от грибов-слизневиков:

-по способности образовывать мицелий

по способности образовывать споры

по способности к половому способу размножения

по способности к бинарному делению

Споры, развивающиеся внутри терминально увеличенного конца гифы-спорофоры:

-эндоспоры

конидии

септы

пили

Споры, располагающиеся на поверхности спорофоры:

эндоспоры

-конидии

септы

пили

Споры, развивающиеся внутри терминально увеличенного конца гифы-спорофоры:

-Mucor

Aspergillus

Penicillium

Конидиефоры заканчиваются терминальными пузырьками или головками, от которых отходят цепочки конидий:

Mucor

-Aspergillus

Penicillium

У конидиефоров грибов на терминальном конце вместо головки развивается путём деления специализированная кисточка:

Mucor

Aspergillus

-Penicillium

Леечная плесень:

Mucor

Aspergillus

-Penicillium

Образуют экзоспоры:

Mucor

-Aspergillus

-Penicillium

Образуют конидии:

Mucor

-Aspergillus

-Penicillium

Высшие грибы:

-эумицеты

фикомицеты

дрожжи

Низшие грибы:

эумицеты

-фикомицеты

дрожжи

Одноклеточные микроорганизмы со сферическими или овоидными клетками:

эумицеты

фикомицеты

-дрожжи

Окраска по Цилю-Нильсену используется:

-для выявления эндоспор

-для индикации микобактерий

для выявления капсул

для выявления жгутиков

для индикации микоплазм

Эндоспоры по Цилю-Нильсену окрашиваются:

в синий цвет

-в красный цвет

в зелёный цвет

в жёлтый цвет

в чётный цвет

Микобактерии по Цилю-Нильсену окрашиваются:

в синий цвет

-в красный цвет

в зелёный цвет

в жёлтый цвет

в чётный цвет

Вегетативная часть клетки, в отличие от споры, по Цилю-Нильсену окрашиваются:

-в синий цвет

в красный цвет

в зелёный цвет

в жёлтый цвет

в чётный цвет

Все бактерии, кроме микобактерий, по Цилю-Нильсену окрашиваются:

-в синий цвет

в красный цвет

в зелёный цвет

в жёлтый цвет

в чётный цвет