12. Выделение и культивирование строгих анаэробов и микроаэрофильных бактерий.

Метод Цейсслера применяется для выделения чистых культур спорообразующих анаэробов. Для этого производят посев на среду Китт-Тароцци, прогревают 20 мин при 80 °C (для уничтожения вегетативной формы), заливают среду вазелиновым маслом и инкубируют 24 ч в термостате. Затем производят посев на сахарно-кровяной агар для получения чистых культур. После 24-часового культивирования интересующие колонии изучаются — их пересеивают на среду Китт-Тароцци (с последующим контролем чистоты выделенной культуры).

Метод Фортнера — посевы производят на чашку Петри с утолщенным слоем среды, разделённым пополам узкой канавкой, вырезанной в агаре. Одну половину засевают культуру аэробных бактерий, на другую — анаэробных. Края чашки заливают парафином и инкубируют в термостате. Первоначально наблюдают рост аэробной микрофлоры, а затем (после поглощения кислорода) — рост аэробной резко прекращается и начинается рост анаэробной.

Метод Вейнберга используется для получения чистых культур облигатных анаэробов. Культуры, выращенные на среде Китта-Тароцци, переносят в сахарный бульон. Затем одноразовой пастеровской пипеткой материал переносят в узкие пробирки с сахарным мясо-пептонным агаром, погружая пипетку до дна пробирки. Засеянные пробирки быстро охлаждают, что позволяет фиксировать бактериальный материал в толще затвердевшего агара. Пробирки инкубируют в термостате, а затем изучают выросшие колонии. При обнаружении интересующей колонии на её месте делают распил, материал быстро отбирают и засеивают на среду Китта-Тароцци (с последующим контролем чистоты выделенной культуры).

13. Понятие об асептике, антисептике, стерилизации и дезинфекции. Асептические и дезинфицирующие вещества.

Асептика – совокупность всех методов направленных на уничтожение или резкое снижение численности.

Дезинфекция – мероприятия, направленные на уничтожение или резкое подавление численности патогенных и условно-патогенных микроорганизмов во внешней среде и на объектах. (методы – химический, физический, механический, биологический) Вещества: Галоидсодержащие, кислородсодержащие, спирты, альдегидосодержащие.

Антисептика – подаление патогенных и условнопатогенных бактерий на коже и слизистых.

Стерилизация – освобождение объекта от всех микроорганизмов путем химического и физических методов.

14. Действие физических факторов на микроорганизмы. Методы стерилизации.

1.Температура: термофилы (50-60) психрофилы (10-15) мезофилы (35-37)

2.Реакция среды – нейтральная и слабо-щелочная или-кислая.

3.Влажность – растут во влажной среде ( либо лиофильное высушивание)

4.Радиация, ультразвук и давление.

Методы стерилизации. Физические: термический – воздушная, паровая стерилизация, пастеризация; радиационный – гамма-лучи, УФ-излучение; механический – фильтрование

Химические: газы и растворы.

15. Бактериофаг. Получение, титрование и практическое применение.

Это вирусы, избирательно поражающие бактериальные клетки. Чаще всего бактериофаги размножаются внутри бактерий и вызывают их лизис. Как правило, бактериофаг состоит из белковой оболочки и генетического материала одноцепочечной или двуцепочечной нуклеиновой кислоты (ДНК или, реже, РНК). Размер частиц приблизительно от 20 до 200 нм.

Для создания высококачественных бактериофагов систематически подбирают штаммы с широкой валентностью и высокой силой литического действия, постоянно обновляют производственные культуры за счет свежевыделенных. Фактором, лимитирующим эффективность фагов, является быстрое формирование резистентных микробов, а также появление в организме антифаговых антител, что исключает возможность многократного парентерального введения фагов.

Титрование бактериофага - определение активности бактериофага по способности различных разведений его взвеси лизировать бактериальные культуры в жидких питательных средах или образовывать негативные колонии в бактериальном газоне на плотных питательных средах.

Применение: фаготипирование и дифференцировка бактерий, лечение.