3.Основные методы исследования морфологии бактерий. Микроскопия. Методы окраски микробов и их отдельных структур.

микроскопический метод: световая, фазово-контрастная, флуоресцентная, электронная;

культуральный метод (бактериологический, вирусологический);

биологический метод (заражение лабораторных животных);

молекулярно-генетический метод (ПЦР - полимеразная цепная реакция)

серологический метод - выявления антигенов микроорганизмов или антител к ним;

Для световой микроскопии биологические объекты обычно окрашивают с целью выявления тех или иных их свойств. При этом ткани должны быть фиксированы, т.к. окраска выявляет определенные структуры только убитых клеток. В живой клетке краситель обособляется в цитоплазме в виде вакуоли и не прокрашивает ее структуры.

Специальные методы окраски бактерий

Наибольшее распространение нашли методы окраски Грама и Циля-Нильсена

По Граму: 1.карболовый генциан виолет 2 мин. 2.Промыть водой. 3.Люголь 1 мин. 4.промыть водой. 5.Спирт 30 сек. 6.вода. 7. водный фуксин 2 мин. 8.вода.

По Цилю: карболовый фуксин до появления паров. 2.Дать остыть. 3.Обесцветить 1% серной кислотой 30 сек. 4.вода 5.Метиленовая синька 5 мин. 6.вода

Дифференцирующие методы окрашивания обычно применяют для окрашивания различных морфологических структур. Для окраски капсул бактерий применяют методы Хисса, Лёйфсона и Антони; последний метод наиболее прост и включает окраску кристаллическим фиолетовым с последующей обработкой 20% водным раствором CuS04.Для окраски жгутиков бактерий предложены методы Лёффлера, Бёйли, Грея и др. Для этих методов характерны первоначальное протравливание препарата и последующая окраска (чаще карболовый фуксин Циля). Окраску спор бактерий проводят после предварительной обработки их стенок. Наиболее прост метод Пешкова, включающий кипячение мазка с синькой Лёффлера на предметном стекле с последующей докраской нейтральным красным. Споры окрашиваются в синий цвет, вегетативные клетки — в розовый.

4. Морфология, ультраструктура и химический состав бактерий. Субклеточные формы бактерий: протопласты, сферопласты, l-формы бактерий.

По форме выделяют следующие основные группы микроорганизмов.

1.Шаровидные или кокки

2.Палочковидные.

3.Извитые.

4.Нитевидные.

Кокковидные: 1.Микрококки расположены в одиночку 2.Диплококки- гонококк, менингококк, пневмококк.

3.Стрептококки. образуют цепочки.

4.Тетракокки. Деление в двух взаимоперпендикулярных плоскостях

5.Сарцины. Деление в трех взаимоперпендикулярных плоскостях

6.Стафилококки напоминают грозди винограда.

Палочковидные формы микроорганизмов.

1.Бактерии- палочки, не образующие спор.

2.Бациллы- аэробные спорообразующие микробы. 3.Клостридии- анаэробные спорообразующие микробы.

Извитые формы микроорганизмов.

1.Вибрионы один изгиб. 2.Спириллы- имеют 2- 3 завитка.

3.Спирохеты- имеют различное число завитков.

Ультраструктура

1.капсула защитная полипептидная или полисахаридная оболочка.Содержит много воды. Функции – защитная, антигенная, запас веществ, адгезия. Бывает микро и макрокапсула. Окраска по Бури-Гинсу.

2.Жгутики – необязательные белковые, из сократительного белка флагеллина.( монотрих, лофотрих, амфитрих,перитрих)

3.Пили – микроворсинки, белковые трубочки на поверхности для адгезии и конъюгации.

4.Клеточная стенка – обязательный элемент бактерии. Функции: форма, защита, транспорт, антигены, спорообразование. Окраска по Граму.

В соответствии с ней выделяют две большие группы- грамположительные ("грам+") и грамотрицательные ("грам - ") бактерии. Стенка грамположительных бактерий после окраски по Граму сохраняет комплекс йода с генциановым фиолетовым (окрашены в сине- фиолетовый цвет), грамотрицательные бактерии теряют этот комплекс и соответствующий цвет после обработки и окрашены в розовый цвет за счет докрашивания фуксином.

Особенности клеточной стенки грамположительных бактерий.

Мощная, толстая, несложно организованная клеточная стенка, в составе которой преобладают пептидогликан и тейхоевые кислоты, нет липополисахаридов.

Особенности клеточной стенки грамотрицательных бактерий.

Клеточная стенка значительно тоньше, чем у грамположительных бактерий, содержит ЛПС, липопротеины, фосфолипиды, Устроена более сложно- имеется внешняя мембрана, поэтому клеточная стенка трехслойная.

5. Цитоплазматическая мембрана

6.Цитоплазма

7. Мезосомы – выросты цитоплазматической мембраны – деление

8. Рибосомы

9.Нуклеоид.

10.Плазмиды – изолированные фрагменты ДНК.

11.Включения

12. Споры – По Цилю-Нильсену

Протопласты – полностью лишены клеточной стенки, Сферропласты – частично лишены.

L-формы – без клеточной стенки но способные размножаться.