9. Условия культивирования микробов. Требования к питательным средам. Классификация питательных сред.

Требования к пит ср: 1) наличие необх пит вещ-в 2)стерильность 3) рН 7-7,4 4) NaCl 0,5 – 1, 5) окислительно-восстановительный потенциал 6) коллоидность или вязкость 7) влажность 8)t 37 9)кислород (для аэробов)

Классификация пит ср:

1) По происхождению (естеств – молоко, фрукты / искусств – мпа, мпб – с гидролизатом кильки)

2) По составу: простые (мпб, мпа) / сложные (сах агар, кровяной агар…)

3) по консистенции: жидкие (мпб) /плотные (мпа) /полужидкие (0,5 – 1% агара) / двухфазные

4) по назначению: консервирующие=трансп – физ р-р + глицерин /селективные (холера – щелочной агар; ЖСА=ср Чистовича – для стафил) / ср обогащения – жидкие пит ср с избират условиями для накопления одного рода мб / дифференциально-диагностические – для отличия одного рода от другого (кров агар – есть или нет гемолиза; ср Эндо – мпа, лактоза, фуксин – лак+ или лак- ; ряд Гиса – мпб + разные сахара – глю, лак, мальт, маннит, сах + фуксин. Среда красннет, может быть газ, если бактерии расщепляют этот сахар ) 10. Микробные ферменты, их использование в культуральной и биохимической идентификации бактерий.

Ферменты – биологические катализаторы, присутствующие во всех живых клетках. Принципы классификации: 1) по локализации (экзо, эндо) 2) по постоянству выделения: (конститутивные, индуктивные) 3) по субстрату (протео-, глико-, липолитические, окислительно восстановительные)

Активность гликолитических ферментов микроба изучают на средах Гиса (мпб + разные сахара – глю, лак, мальт, маннит, сах + фуксин + пробирка с мпб и инфикаторной бумажкой - индол)

Ферменты патогенных микробов:

1. повреждающие клетки макроорганизма

- гемолизин (стафилококки на кров агаре – зона гемолиза)

- лецитиназа (помутнение вокруг колонии стафилококка на ЖСА)

- лейкоцидин

- липазы

2. ферменты инвазии и распространения:

- плазмокоагулаза, фибринолизин, нейраминидаза, гиалуронидаза, коллагеназа

3. ферменты, катализирующие обрaз-е токсических веществ

- декарбоксилаза, уреаза

11. Понятие о чистой культуре микроба, штамме, клоне. Методы выделения чистых культур аэробных бактерий.

Чистая культура – совокупность мб одного вида. Ее выделяют для 1) диагностики инфекций и опр-я чувствительности к аб 2)получ-я биолог препаратов – вакцин, сывороток... 3)для изучения св-в микробов. Этапы выделения: 1) разделение микробов разных видов 2)накопление 3) идентификация – установление рода и вида мб по его св-вам (морф, тинктор, культ, фекмент, аг, пробы на жив, с б/фагами, чувств-ть к аб)

Методы выделения чистой культуры:

1. Метод пастера = метод серийных разведений. Послед разведение микробов в жидкой пит среде

2. Метод Коха – метод пластинчатых разведений. То же что в методе Пастера, + последующий пересев на плотн пит ср из каждого разведения

3. Метод Коха – Дрегальского. Из жидкой пит ср с бактериями посев на несколько МПА

4. Метод Цейслера – тоже самое, только на сахарно кровяной агар

5. Метод Вейнберга – последовательный пересев в пробирки с охлажденным агаром, затем запаиваются. Подходит для анаэробов

Штамм – это культура бактерий, выделенная из конкретного организма, отличающаяся какими то признаками

Клон – группа бактерий, полученная из одной материнской клетки. 12. Выделение и культивирование строгих анаэробов и микроаэрофильных бактерий.

Выделение – метод Вейнберга например. См выше.

Способы создания анаэробных условий: 1) физические – высокий столбик агара, вазелиновое масло, прогревание, кипячение пит среды перед посевом. 2) химические – редуценты кислорода – гидросульфит натрия… 3) биологические – добавление в пит ср мяса – связывание О2; совместное культивирование аэтобов и анаэробов по методу фортнера.

Среды для анаэробов: сахарный МПА или МПБ, тиогликолевая среда, сахарно-кровяной агар Цейслера, ср Китта-Тароцци (мпб, сахар, мясо, печень), ср Вильсона-Блэра (мпа, сахар, FeCl2, Na2SO3)