Методы окраски мазков

Простой метод. Фиксированный мазок окрасить каким-либо одним красителем, например фуксином водным (1-2 мин) или метиленовым синим (3-5 мин), промыть водой, высушить и микроскопировать. Сложные методы. Последовательно нанести на препарат определенные красители, различающиеся по химическому составу и цвету, протравы, спирты, кислоты и др. Это позволяет выявить определенные структуры клеток и дифференцировать одни виды микроорганизмов от других. Окрас методом Грама является сложным методом.

Рис.2. Окрас методом Грама (схема).

• На фиксированный мазок нанести карболово-спиртовой раствор генцианового фиолетового через полоску фильтровальной бумаги. Через 1-2 мин ее снять, а краситель слить.

• Нанести раствор Люголя на 1-2 мин.

• Обесцветить этиловым спиртом в течение 30-60 с до прекращения отхождения фиолетовых струек красителя.

• Промыть водой.

• Докрасить водным раствором фуксина в течение 1-2 мин, промыть водой, высушить и микроскопировать.

Грамположительные бактерии окрашиваются в темно-фиолетовый цвет,        грамотрицательные - в красный.

Знакомство с микроскопической техникой. Работа с биологическим микроскопом.

Для микроскопических исследований используют несколько типов микроскопов (биологический, люминесцентный, электронный и другие) и специальные методы микроскопии (фазово-контрастный, темнопольный и др.).

Рис. 3. Светооптический биологический микроскоп.

При микроскопии препаратов с иммерсионным объективом следует строго придерживаться определенного порядка в работе:

1. на приготовленный и окрашенный мазок на предметном стекле нанести каплю иммерсионного масла и поместить его на предметный столик, укрепив зажимами;

2. повернуть револьвер до отметки иммерсионного объектива Х90;

3. осторожно опустить тубус микроскопа до погружения объектива в каплю масла;

4. установить ориентировочный фокус при помощи макрометрического винта;

5. провести окончательную фокусировку препарата микроскопическим винтом, вращая его в пределах только одного оборота.

Рис. 4. Иммерсионный объектив (с черной полосой) погружают в каплю масла на препарате-мазке.

По окончании работы с микроскопом необходимо вытереть масло с иммерсионного объектива и перевести револьвер на малый объектив Х8.

Характеристика культуры по морфологическим и тинкториальным признакам

При микроскопии мазков изучают морфологические и тинкториальные свойства культур бактерий: форму, структуру и размер клеток, наличие спор, капсулы, жгутиков, пилей, расположение клеток относительно друг друга, цвет в соответствии с использованными методами окраски, наличие и характер подвижности.

Рис. 5. Стрептококки (род. Streptococcus), стафилококки (род Staphylococcus), менингококки (род Neisseria).

Рис. 6. Кишечная палочка (род. Escherichia), дифтерийная палочка (род Corynebacterium), микобактерии туберкулеза (род Mycobacterium).

Рис. 7. Возбудитель сибирской язвы (род Bacillus), возбудитель газовой гангрены (род Clostridium).