Контрольні запитання

• Процес нітрифікації. Мікроорганізми, які здійснюють нітрифікацію.

• Проведення якісної реакції на нітрати і нітрити.

Тема 6. Денітрифікуючі бактерії

Денітрифікація – мікробіологічний процес відновлення солей азотної і азотистої кислот до вільного молекулярного азоту.

Денітрифікацію здійснюють бактерії за певних умов: за наявністі в середовищі нітратів чи нітритів, нейтральної чи лужної реакції і недостатньої аерації. Мікроорганізми, які здійснюють процес денітрифікації, широко розповсюджені в природі. Денітрифікатори – хемоорганогетеротрофи, факультативні анаероби. Більшість денітрифікаторів використовують нітрати тільки в енергетичному обміні як акцептор електронів (дисиміляційна нітратредукція), але деякі використовують нітрати як джерело азоту для констуктивних процесів (асиміляційна нітратредукція).

ЛАБОРАТОРНА РОБОТА

Мета роботи: виділити з ґрунту денітрифікуючі бактерії і вивчити їх.

Завдання

1. Отримати накопичувальні культури ґрунтових денітрифікаторів.

2. Вивчити морфологію клітин.

Матеріали та обладнання

1. Мікроскоп МБІ-1, предметні скельця, імерсійна олія, бактеріологічна петля.

2. Стерильні пробірки та піпетки на 1 мл, колби на 50мл, стерильні чашки і пробірки, зразки ґрунту.

3. Середовище Гільтея такого складу (г/л): лимоннокислий натрій чи калій – 5, нітрат калію – 2,0, аспарагін – 1,0, однозаміщений фосфат калію – 2,0, сульфат магнію – 2,0, хлорид кальцію – 0,2, хлорид заліза – сліди, вода з водопроводу, рН середовища 7,0.

4. Генціановий фіолетовий, фуксин, розчин Люголю, 96%-й етиловий спирт.

Хід роботи

Для отримання накопичувальної культури денітрифікуючих бактерій готують поживне середовище Гільтея. Після приготування його наливають у пробірки на 2/3 висоти. Попередньо в кожну пробірку вміщують поплавок запая ним кінцем догори й стерилізують при 0,5 атм 30 хв. Пробірки засівають ґрунтовим розчином і посіви інкубують у термостаті за 28°C 7 - 10 діб. Найбільш суттєвою ознакою розвитку денітрифікаторів на середовищі Гільтея є газоутворення. Його відмічають візуально за утворенням піни і витісненням середовища з поплавка (бульбашка газу в поплавку). Крім того, розвиток денітрифікаторів супроводжується зникненням із середовища нітратів, підлуговуванням та помутнінням середовища. Зміну рН середовища визначають універсальним рН-індикатором. Наявність нітритів визначають за допомогою реактива Грісса. Результати заносять до табл. 5.

З накопичувальної культури готують мазок, мікроскопують і замальовують.

Таблиця 5

Розвиток денітрифікаторів на середовищі Гільтея

Тип ґрунту	Утворення газу	Наявність у середовищі NO2	рН середовища	Помутніння середовища

Примітка. Як контроль використовують стерильне, не засіяне ґрунтом, середовище.