Культуральное исследование

Культуральное исследование является высокочувстви­тельным и специфическим методом лабораторной диагности­ки микозов. Его необходимо производить независимо от ре­зультатов микроскопии, так как культуральный метод позво­ляет иногда выявлять возбудителя при отрицательных данных микроскопии; он дает возможность определять род и вид возбудителя и, следовательно, проводить адекватную те­рапию и профилактику заболевания. Особенно полезен культуральный метод для диагностики латентных форм ми­козов, носительства дерматофитов здоровыми людьми.

Перед посевом патологического материала его расщепля­ют на предметном стекле на мелкие кусочки, 5 - 6 из них переносят на поверхность косого агара и располагают на расстоянии 1 - 2 см один от другого. Материалом одной про­бы засевают не менее 2 - 3 пробирок (волосы) или 4 - 5 про­бирок (кожные и ногтевые чешуйки). Для первичной изоля­ции дерматофитов лучше всего пригодны стандартная агари-зированная среда Сабуро с 2 - 4% глюкозы или сусло-агар, содержащие антибиотики (пенициллин 50 мкг/мл + стреп­томицин или биомицин (50 мкг/мл и 200 мкг/мл соответст­венно) и антидрожжевой антибиотик актидон (циклогексамид) 0,1 - 0,5 мг/мл. Актидон не влияет на рост дермато­фитов и подавляет многие плесневые грибы, а также виды Candida и Cryptococcus [Аравийский Р. А., Горшкова Г. И., 1995].

Посев производят в боксе над пламенем газовой или спиртовой горелки платиновой петлей, микологическим крючком или лопаточкой из нихрома. Держа пробирку в ле­вой руке, охватывают ее над пламенем горелки, захватывая пробку мизинцем правой руки, которой одновременно дер­жат петлю. Прокаленную докрасна петлю остужают и одно­временно увлажняют прикосновением к поверхности среды в стороне от места предполагаемого посева. Затем берут час­тицу материала и наносят на поверхность агара. Пробирку закрывают пробкой, предварительно обожженной над пламе­нем. Так же производят пересев из пробирки в пробирку.

Аналогичным образом производят посев на чашку Пет­ри. Необходимо, чтобы имеющаяся в ней среда как можно меньше соприкасалась с окружающим воздухом, поэтому крышку следует приподнимать настолько, чтобы в нее сво­бодно могла пройти только петля с патологическим материа­лом.

Посевы инкубируют при 22 - 30 °С (лучше всего 28 °С). Появление роста дерматофитов отмечается с 4-го по 12-й день инкубации в точках посева по краям внесенного мате­риала. При отсутствии роста в течение 30 дней результаты культивирования считаются отрицательными. В оптимальных условиях первичные культуры многих дерматофитов можно идентифицировать на 7 - 10-й день после посева, но следить за посевами нужно в течение 20 - 30 дней. Первич­ные культуры растут сравнительно медленно, при появлении роста в первичным посеве необходимо произвести отсев от края колонии на свежую дифференциальную среду для по­лучения чистой культуры, которая будет служить материа­лом для идентификации выделенного дерматофита.

Люминесцентное исследование

В 1925 г. Margaret и Deveze обнаружили, что волосы, по­раженные некоторыми дерматофитами, дают характерное свечение в ультрафиолетовых лучах, пропущенных через фильтр Byда. Стекло Byда состоит из сульфата бария, со­держит около 9% окиси никеля; оно пропускает лучи дли­ной 365 нм. В качестве источника ультрафиолетовых лучей можно использовать различные приборы. Природа свечения точно не установлена. Волос продолжает светиться после ги­бели гриба и после попыток экстрагировать флюоресцирую­щий материал горячей водой или холодным раствором бро­мида натрия. Интенсивность и характер свечения зависят от рН раствора. Полагают, что флюоресцирующая субстанция появляется в процессе взаимодействия гриба и растущего во­лоса.

Свечение в ультрафиолетовых лучах, пропущенных че­рез фильтр Вуда, характерно только для волос, пораженных грибами рода Microsporum (M. canis, M. audouinii, M. ferrugineum, M. distortium, изредка M. gypseum и M. nanum), a также Trichophyton schonleinii. Волосы, пораженные микроспорумами, особенно M. canis и M. audouinii, дают наиболее яркое свечение; волосы, пораженные Т. schonleinii, имеют тусклую зеленоватую флюоресценцию.

Свечение наблюдается только в полностью пораженных грибом волосах. Его может не быть в свежих очагах пораже­ния. В этих случаях следует эпилировать волосы из краевой, наиболее активной зоны, и свечение можно обнаружить в корневой части волос.

Люминесцентный метод можно использовать как для диагностики и контроля за эффективностью лечения у от­дельных больных, так и в эпидемиологических очагах. Ком­пактные передвижные установки удобны для обследования контактных людей в школах, детских садах и т. п.

Люминесцентное обследование необходимо производить в затемненной комнате, очаги поражения должны быть предварительно очищены от корок, остатков мази и т. п. Люми­несцентный метод можно использовать для диагностики отрубевидного лишая, особенно при локализации очагов пора­жения на волосистой части головы. Очаги поражения при этом заболевании имеют красновато-желтое или бурое свече­ние. Это свечение, однако, не является строго специфичным, так как может наблюдаться при наличии перхоти на воло­систой части головы и даже у здоровых людей в области устьев волосяных фолликулов на лице и верхней части ту­ловища. Выявленные с помощью люминесцентного метода пораженные волосы должны обязательно подвергаться мик­роскопическому исследованию.