22. Кратковременное хранение спермы.

Кратковременное хранение спермы, при плюсовых температурах.

Для хранения спермы нужно снизить ее активность.

2 способа:

• понижение температуры (температурный анабиоз).

• добавление в сперму веществ снижающие метаболические и обменные процессы.

Сперма хряков.

• Плохо переносит заморозку. Хранят создают химический анабиоз. Допускается сперма хряков с концентрацией не ниже 0,15 млрд/мл подвижность не ниже 7 балов

• Степень разбавления 2:6 среднее 1:1 до 1:9

• Температура +16-18С.

• Применяют разбавители ГХЦ глюкозохелатоцетратный и ГХЦС глюкозохелатоцетратосульфатный. Сульфат как буферный раствор.

• Хранят до 72 часов. Хранят в полиэтиленовых флаконах 100 – 50 мл но обычно спермодоза 100 мл. Хранят в сумках термосах. Перед осеменением подогревают.

• Если не используют в течении 72 часов утилизирую (выбраковка).

Сперма остальных с\х животных хранят при температуре тающего льда. Снижает обменные процессы и удлиняют хранение.

Сперма быка:

• 0.7 млрд\мл подвижность 8 балов. разбавление от 1:9 до 1:31.

• Температура +2-5С

• Разбавитель глюкозоцетратножелточный ГЦЖ

• Хранят до 72 часов.

Сперма баранов

• Концентрация 1 мрлд/мл подвижность 8 балов, разбавление 1:1 1:3

• Температура +2-5С

• Разбавитель ГЦЖ

• Хранят 24 часа

• Хранят в стерильных флаконах или бытовой термос или термосы со льдом.

Сперма жеребцов

• 0,15млрд/мл, подвижность 6 балов, разбавление 1:1 1:3

• Температура +2-5

• Разбавитель лактозахелатоцитратожелточный ЛХЦЖ

• Хранят 48 часов

23. Криоконсервация спермы быков.

Криоконсервация – глубокое замораживание в жидком азоте -196С.

Преимущество метода:

• обменные процессы замедляются в млн раз

• прекращается старение спермиев

• находясь в состояние глубокого анабиоза спермии сохраняют свои биологические свойства в течении десятилетий. Получить потомство через много лет после гибели родителей. Произвести оценку производителя по качеству потомства.

• Сперму можно поставлять потребителям 1-2 раза в год а жидкий азот 1 раз в 40-60 дней.

• Исключаются потери спермиев

• Появляется возможность индивидуального подбора родительских пар.

Криоконсервация требует точного выполнения этапов технологического цикла.

1. получение и оценка спермы. Используется сперма быков с активностью 8 балов 0.7 млрд/мл.

2. разбавление средой содержащий желток и глицерин. Лактозоглицериножелточная среда ЛГЦЖ.

3. эквилибрация – охлаждение разбавленной спермы при температуре +2-4С в течении 2-6 часов.

4. расфасовка и маркировка доз

5. замораживание расфасованной спермы

6. хранение замороженной спермы.

Сперму быков замораживают 3 способами

• в необлицованных гранулах

• облицованные гранулы

• полипропиленовые соломинки – пайеты.

Замораживание спермы в необлицованных гранулах

Используют:

• термоизолированный сосуд из нержавеющей стали

• фторопластовая пластина с лунками и углублениями

• держатель пластины

• лопатка для сбора гранул

Технология:

В сосуд наливают жидкий азот. На дно опускают фторопластовую пластину несколько минут охлаждают до прекращения кипения азота, затем ее подымают на пол см выше уровня азота. После испарения азота с поверхности пластины протирают стерильной пластинкой и больше с помощью шприца ухе охлажденную сперму раскапывают в лунки по 0,1 или 0,2 мл. после того как гранулы затвердеют пластину еще 1-2 минуты выдерживают в парах азота, а затем на 2 минуты погружают в азот. Далее гранулы собирают, ссыпают в контейнер и помещают в матерчатый мешочек или специальные канистры.

Перед закладкой на хранение одну 2 гранулы размораживают и оценивают по подвижности (не ниже 4 балов).

Недостатки:

• Большая доля низко производительного ручного труда.

• Отсутствие маркировки спермодоз.

• Прямой контакт спермы с жидким азотом.

Замораживание в облицованных гранула (харьковский метод)

Разбавленную сперму заполняют тонкостенную полимерную трубку диаметр 0.4 см. В бобины с трубкой устанавливают в автомат ПРЖ. Он делит трубку на спермодозы одновременно герметизирует и маркируют. Далее переносят в алюминиевые тубы. Из ввинчивают в устройство для экфилибрации и замораживания спермы ЭКЗ, которые выдерживают в холод при темп +2-4 на 4- 6 часов

После этого трубку крепят в стержне - держатели и помещают в жидкий азот. На 8 – 10 минут.

Метод обеспечивает подготовку 2000тыс спермадоз в час.

Применение ограничено для осеменения коров используют шприц – оплодотворяемость ниже.

Замораживание спермы в полипропиленовых соломинках или пайетах.

Разбавленную сперму фасуют в полипропиленовые соломинки. Происходит автоматически на машине М6-МУ2-С и маркируют.

Соломинки укупоривают шариками. Один шарик – пробка поршень, а другой герметизирующая пробка.

Соломинки укладывают на раскладные рейки выдерживают в холодильнике температура +2-4 время 3-4 часа.

Затем замораживают в стационарном хранилище в парах жидкого азота – 150 ХБ05 на щите не ржавеющего металла по 750 спермадоз.

Цикл заморозки 7 минут.

После замораживания соломинки помещают в пластмассовые стаканы, в которых их хранят полностью погруженные в жидкий азоте.

Хранение спермы

На плем. предприятиях сперму хранят в спермобанках в стационарных хранилищах жидкого азота по 200 тыс спермодоз. Извлекают от туда по мере необходимости.

На прифермерских пунктах искусственных осеменения сперму хранят в сосуда Дьюара различной конструкции. Харьков 40 – 60 дней хранят.