Індивiдуалiзацiя навчання з теми.
1. Пеpелiк найбiльш складних питань:
а) феpменти слини, бiологiчна pоль, тип pеакцiй, якi вони каталiзують;
б) зв'язок феpментiв слини з хвоpобами слинних залоз; клiнiчне значення їх визначення.
2. Пiдготуйте pефеpативну доповiдь на тему
3. Студентам-гуpткiвцям доповiсти пpо особливостi змін пpотеїназ- та антипpотеїназ слини пpи стpесоpних впливах.
4. Розв'яжiть ситуацiйнi задачi з теми.
Алгоритм лабораторної роботи.
Кількісне визначення активності амілази.
Принцип визначення активності амілази за Вольгемутом:
Метод заснований на здібності амілази розщеплювати (гідролізувати) крохмаль. Знаходять таке розведення слини, яке розщеплює 2 мг крохмалю (в 2 мл 0,1% розчину крохмалю) за 30 хвилин при t=38 0С. Потім розраховують кількість крохмалю, що розщеплюється 1 мл нерозбавленої слини.
В нормі активність амілази слини – 160-320 ум.од.
Хід роботи.
В 10 пробірок наливають по 1 мл води. В 1-у пробірку додають 1 мл слини, розведеної в 10 раз, перемішують. Набирають в піпетку 1 мл суміші і переносять її в 2-у пробірку, їз неї – таким самим способом у 3-у і т.д. до 10-ї пробірки. Із 10-ї пробірки 1 мл суміші виливають. У всі пробірки доливають по 1 мл води та по 2 мл крохмалю, перемішують і розміщують в термостат на 30 хвилин при t=38 0 С. Через 30 хвилин пробірки виймають, охолоджують, додають по 1 краплі розчину Люголю, перемішують. Рідина в пробірках забарвлюється в жовтуватий, рожевий та фіолетовий кольори. Відмічають останню пробірку з жовтим кольором, де гідроліз крохмалю пройшов повністю і роблять розрахунок.
Розрахунок:
|
|
Розведення слини |
|||||||||
|
1:20 |
1:40 |
1:80 |
1:160 |
1:320 |
1:640 |
1:1280 |
1:2560 |
1:5120 |
1:10240 |
|
|
Пробірки |
||||||||||
|
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
7 |
8 |
9 |
10 |
|
|
Колір розчину з йодом |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Висновки |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Відмічають пробірку, де гідроліз крохмалю пройшов повністю. Наприклад, жовтий колір з’явився у 4-й пробірці, де слина розведена в 160 разів; 1/160 мл слини розщеплює 2 мл 0,1% розчин крохмалю; 1 мл нерозведеної слини розщепив Х мл 0,1% розчину крохмалю:
Х=
=
320 мл 0,1% розчину крохмалю.
Таким чином, амілазна активність слини дорівнює 320 ум.од.