!!!Лелевич. Основы клинической биохимии

Министерство здравоохранения Республики Беларусь

УЧРЕЖДЕНИЕ ОБРАЗОВАНИЯ «ГРОДНЕНСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ

УНИВЕРСИТЕТ»

Кафедра клинической лабораторной диагностики и иммунологии

ОСНОВЫ КЛИНИЧЕСКОЙ БИОХИМИИ

Пособие для студентов медико-диагностического факультета

Под редакцией доцента С.В. Лелевича

Гродно

ГрГМУ

2013

УДК 616-008.9-074(075.8) ББК 52.57я73

О 75

Рекомендовано Центральным научно-методическим советом УО «ГрГМУ» (протокол № 5 от 28.02.2013 г.).

Автор: доц. каф. клинической лабораторной диагностики и иммунологии, канд. мед. наук С.В. Лелевич; асс. каф. клинической лабораторной диагностики и иммунологии И.А. Курстак;

асс. каф. клинической лабораторной диагностики и иммунологии Т.Н. Гриневич; доц. каф. клинической лабораторной диагностики и

иммунологии, канд. биол. наук В.В. Воробьев.

Рецензент: зав. кафедрой анестезиологии и реаниматологии, профессор В.В. Спас.

О 75 Основы клинической биохимии : пособие для студентов медико-диагностического факультета / С.В. Лелевич и др. - Гродно: ГрГМУ, 2013.– 184с.

ISBN 978-985-558-234-3.

В пособии изложена информация по клинико-биохимическим методам определения различных веществ в биологических материалах. Приводится информация о лабораторных методах оценки белкового, углеводного, липидного, водно-электролитного и минерального обменов, а также кислотно-основного состояния. Обсуждаются вопросы касательно клинико-биохимических исследований в эндокринологии, коагулологии, а также онкологии.

Пособие предназначено для студентов медико-диагностического факультета.

УДК 616-008.9-074(075.8) ББК 52.57я73

ISBN 978-985-558-234-3

© УО «ГрГМУ», 2013

2

АВТОРЫ:

ЛЕЛЕВИЧ

Сергей Владимирович доцент кафедры клинической лабораторной диагностики и иммунологии УО «Гродненский государственный медицинский университет», кандидат медицинских наук. Автор 200 печатных работ, в том числе 7 монографий, 70 научных статей, 13 учебно-методических пособий, патента на изобретение. Стипендиат специального фонда Президента Республики Беларусь, обладатель премии имени профессора Д.А. Маслакова.

КУРСТАК

Ирина Андреевна ассистент кафедры клинической лабораторной диагностики и иммунологии УО «Гродненский государственный медицинский университет». Автор более 20 печатных работ, 2 учебнометодических пособий, инструкции по применению.

ГРИНЕВИЧ

Татьяна Николаевна ассистент кафедры клинической лабораторной диагностики и иммунологии УО «Гродненский государственный медицинский университет». Автор более 20 печатных работ.

ВОРОБЬЕВ

Виталий Владимирович доцент кафедры клинической лабораторной диагностики и иммунологии, кандидат биологических наук. Автор более 26 учебнометодических и 67 научных работ, в том числе монографии, 11 рационализаторских предложений. Обладатель премии специального фонда Президента Республики Беларусь.

3

СОДЕРЖАНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ……………………………………………………5

ВВЕДЕНИЕ………………………………………………………………... 8

ЛАБОРАТОРНЫЕ МЕТОДЫ ОЦЕНКИ БЕЛКОВОГО ОБМЕНА……… 9

МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ НЕБЕЛКОВЫХ АЗОТСОДЕРЖАЩИХ КОМПОНЕНТОВ В КРОВИ И МОЧЕ…………………………………. 23

МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФЕРМЕНТАТИВНОЙ АКТИВНОСТИ…….. 39

ЛАБОРАТОРНЫЕ МЕТОДЫ ОЦЕНКИ ПИГМЕНТНОГО ОБМЕНА…… 69

ЛАБОРАТОРНЫЕ МЕТОДЫ ОЦЕНКИ УГЛЕВОДНОГО ОБМЕНА….. 76

МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПОКАЗАТЕЛЕЙ ЛИПИДНОГО ОБМЕНА… 86

ЛАБОРАТОРНЫЕ МЕТОДЫ ОЦЕНКИ КИСЛОТНО-ОСНОВНОГО СОСТОЯНИЯ…………………………………………………………………. 96

МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПОКАЗАТЕЛЕЙ ВОДНОЭЛЕКТРОЛИТНОГО И МИНЕРАЛЬНОГО ОБМЕНА…………………… 110

ЛАБОРАТОРНАЯ ОЦЕНКА ОБМЕНА ЖЕЛЕЗА………………………… 123

НЕКОТОРЫЕ АСПЕКТЫ КЛИНИЧЕСКОЙ ЭНДОКРИНОЛОГИИ…… 130

ЛАБОРАТОРНЫЕМЕТОДЫОЦЕНКИСИСТЕМЫГЕМОСТАЗА……………. 153

ЛАБОРАТОРНЫЕ АСПЕКТЫ ОНКОЛОГИЧЕСКИХ ЗАБОЛЕВАНИЙ… 168

ЛИТЕРАТУРА………………………………………………………………. 181

4

КК- креатинкиназа

5

6

7

ВВЕДЕНИЕ

Клиническая биохимия – клинико-диагностическая дисциплина, которая занимается разработкой и использованием стандартных методов диагностики, а также осуществляет контроль за течением заболеваний с позиций биохимии. Клиническая биохимия является важнейшим разделом лабораторной диагностики, наряду с клинической лабораторной гематологией, иммунологией, клинической серологией и микробиологией, клинической токсикологией и др. Данная дисциплина располагает специфическим набором аналитического оборудования, использует множество диагностических методов и позволяет врачу-клиницисту оценить диагностически и прогностически значимые нарушения биохимических процессов в организме человека. Эта область лабораторной диагностики достаточно бурно развивается. Современная клиническая биохимия позволяет существенно облегчить квалифицированную и обоснованную постановку диагноза, выбор лечения и оценку прогноза при многих заболеваниях.

Клинико-биохимические исследования выполняются практически всем пациентам. Их применяют главным образом для подтверждения или уточнения диагноза, характеристики формы, тяжести течения и определения прогноза болезни, выбора этиологической и патогенетической терапии, контроля за результатами лечения, а также для обнаружения патологии при скрининговых исследованиях.

В зависимости от клинических задач биохимические исследования могут производиться однократно и многократно (в динамике), а также в процессе проведения функциональных или фармакологических тестов со стимуляцией или торможением этапов исследуемого обмена веществ, клеточных или гуморальных реакций либо других функций, выраженность или качество которых отражается в параметрах определяемого лабораторного показателя.

Биохимические технологии регулярно обогащаются новыми методами исследований. Повышение их чувствительности и специфичности способствует расширению объектов биохимического анализа. Помимо традиционного анализа сыворотки крови и мочи все шире в диагностических целях используется конденсат выдыхаемого воздуха, выпотная, слезная жидкость, ликвор, клеточные элементы и др. Широкое внедрение биохимических анализаторов позволяет проводить комплексный анализ с использованием все меньшего объема биологической пробы.

8

ЛАБОРАТОРНЫЕ МЕТОДЫ ОЦЕНКИ

БЕЛКОВОГО ОБМЕНА

Методы определения общего белка в крови

Среди методов определения концентрации общего белка в биологических материалах можно выделить несколько основных групп, основанных на различных принципах:

1.Азотометрические.

2.Гравиметрические.

3.«Преципитационные».

4.Спектрофотометрические.

5.Рефрактометрические.

6.Колориметрические.

Кроме перечисленных методов, также разработаны флюориметрические, поляриметрические методы, а также атомноабсорбционная спектрофотометрия.

Азотометрические методы

Азотометрические методы определения общего белка основаны на определении количества белкового азота, образующегося при разрушении аминокислот. Впервые метод был предложен Къедалем в 1883 году. В этом методе, азот, содержащейся в составе белков, окисляют до иона аммония и его количество определяют титрованием раствором соляной кислоты. Исходя из того, что белки биологических жидкостей содержат в среднем 16% азота, полученное в результате анализа его количество умножают на коэффициент 6,25. Для отдельных фракций белка в сыворотке или плазме величина фактора колеблется в диапазоне 5,69-6,52.

Недостатком азотометрических методов является длительность и сложность процедуры. Автоматизация позволяет использовать этот метод в ряде случаев в качестве метода сравнения.

Гравиметрические методы

Гравиметрические (весовые) методы определения общего белка основаны на высушивании белков до постоянной массы и их

9

взвешивании на аналитических весах. Методы трудоемки и практически не используются. Гравиметрический метод в настоящее время может использоваться в некоторых лабораториях для определения фибриногена в плазме крови.

«Преципитационные» методы

Данные методы определения общего белка основаны на снижении растворимости белков и образовании суспензии взвешенных частиц под воздействием различных агентов. О содержании белка в исследуемой пробе судят либо по интенсивности светорассеяния (нефелометрический метод), определяемого числом светорассеивающих частиц, либо по ослаблению светового потока образовавшейся суспензией (турбидиметрический метод).

Результаты данных методов зависят от следующих факторов:

скорости смешивания реактивов;

температуры реакционной смеси;

значения рН среды;

присутствия посторонних соединений;

способов фотометрии.

Тщательное соблюдение условий реакции способствует образованию стабильной суспензии с постоянным размером взвешенных частиц и получению воспроизводимых результатов.

Спектрофотометрические методы

Спектрофотометрические методы определения общего белка основаны на измерении светопоглощения в ультрафиолетовой области. Растворы белка обладают поглощением при длинах волн 200-225 и 270-290 нм. Поглощение при 270-290 нм определяется присутствием в молекуле белка ароматических аминокислот – тирозина, триптофана и фенилаланина. Поглощение при 200-225 нм практически в 20 раз выше, чем при 280 нм, и обусловлено, главным образом, пептидными связями. Точность и специфичность методов определения белка, основанных на поглощении при 270-290 нм, невелика, поскольку содержание тирозина и триптофана может колебаться в различных белках сыворотки крови. Кроме того, при-

10