Лабораторная диагностика нарушений порфиринового обмена
Исследование порфиринов в биологическом материале представляет определенные трудности в связи с небольшим содержанием, наличием различных типов и изомеров (различное расположение радикалов), определение которых требует специфических методов. Принцип - соединения, имеющие кольцо порфирина, флуоресцируют и характеризуются интенсивным поглощением на границе видимой и ультрафиолетовой областей спектра. Восстановленные формы порфиринов (порфириногены) бесцветны.
Определение уровня порфиринов в моче
Определение содержания порфобилиногена в моче
Определение ДАЛК в моче
Определение протопорфирина в эритроцитах
Определение уровня порфиринов в моче
1.Качественные – основаны на способности порфиринов в УФ давать красную флуоресценцию. В норме с мочой выделяется 0- 2 мг/л (вне чувствительности метода).
2.Количественные - унифицированный метод Соулсби - основан на спектрофотометрии. Производят экстракцию порфиринов из мочи, а затем измерение оптической плотности на 3 длинах волн – 380, 402, 430нм → пересчет по креатинину.
Норма – 30,5-122 н/моль/г креатинина. Показания: заболевания печени, Порфирии.
Определение содержания порфобилиногена в моче
Материал: свежевыделенная моча (хранение не более 2 часов при комнатной температуре) или в холодильнике при 4 0С или -20 0 С.
Используется качественная реакция с реактивом Эрлиха (парадиметилбензальдегид в концетрированной соляной кислоте) +бутанол. Смешивают, встряхивают, отстаивают. Происходит разделения на 2 слоя. Верхний – бутанол. Внизу – водная фаза. У здоровых – окрашен бутанольный слой, у больных – водный.
Норма: ПБГ в моче не обнаруживается. Реакция становится положительной при концентрации ПБГ выше 6 мг/л (норма 0-2 мг/л).
Показания: Порфирия, анемия, свинцовая интоксикация
Определение ДАЛК в моче
Требования к материалу см. выше. Определяют по реакции с реактивом Эрлиха после удаления ПБГпутем сорбции на активированном угле. Содержание ДАЛК рассчитывают по калибровочному графику, затем пресчитывают на 1г креатинина, поскольку диурез за сутки может быть различным.
Норма 3,9-19 мкмоль/г креатинина.
Показания: нарушения порфиринового обмена, интоксикации свинцом, бензолом и др.
Порфирии
Группа заболеваний (преимущественно наследственных), при которых частичный дефицит одного из ферментов синтеза порфирина приводит к уменьшению образования гемма и, следовательно, к устранению подавляющего эффекта гемма на АЛК-синтазу, результатом чего является образование избыточных количеств предшественников порфиринов и порфиринов.
Клинические проявления и диагностика порфирий
Клиника зависит от накопления тех или иных промежуточных продуктов.
Образование избыточных количеств ранних предшественников порфирина - ДАЛК, порфобилиногена (нейротоксины) → неврологические расстройства.
Накопление порфиринов - воспалительная реакция в ответ на освещение кожных покровов светом. Механизм - порфирины абсорбируют свет, переходят в возбужденное состояние, вызывая образование токсичных свободных радикалов).
Диагноз - характерные клинические проявления и определение порфиринов и их предшественников в крови, кале и моче
