Mikrobiologia_praktika

Сахаролитические свойства (среды Гисса)

В среду Гисса добавляется индикатор для определения сахаролитической активности:

•Индикатор Андреде – кислый фуксин, едкий натр, вода дист. (от синего к красному)

•Индикатор ВР - водный голубой и розоловая кислота (от красного к синему)

•Индикатор крезолрот (от красного к фиолетовому)

I - 'пестрый ряд':

а - жидкая среда с углеводами и индикатором Андреде; б - полужидкая среда с индикатором ВР:

1 - микроорганизмы не ферментируют углевод; 2 - микроорганизмы ферментируют

углевод с образованием кислоты; 3 - микроорганизмы ферментируют углевод с образованием кислоты и газа

Сахаролитические свойства (среда Рапопорта)

Жидкая среда Рапопорта (только энтеробактерии) применяется для определения продуктов ферментации углеводов.

Изменение цвета среды после инкубации говорит о наличии кислоты, а поднятие поплавка на поверхность – о наличии газа.

Поплавок на поверхности среды

Вывод: данная культура ферментирует углеводы до кислоты и газа.

Протеолитические свойства (разжижение желатина)

Посев уколом в столбик желатина приведёт к разжижению столбика при наличии протеолитической активности у культуры.

Протеолитические свойства микроорганизмов

I - формы разжижения желатина; II - определение сероводорода; III - определение индола:

1 - отрицательный результат;

2 - положительный результат

Протеолитические свойства (образование индола)

Индол определяют методом Мореля. Для этого делают посев культуры в МПБ с добавлением триптофана и под пробку помещают фильтровальную бумагу, пропитанную щавелевой кислотой. При наличии индола нижняя часть бумаги покраснеет.

Также применяется реактив Эрлиха. В посев добавляют специальный реактив. При наличии индола наблюдается красное окрашивание.

Протеолитические свойства (образование сероводорода)

Под пробку пробирки с посевом кладут фильтровальную бумагу, пропитанную ацетатом свинца. В присутствии сероводорода бумага почернеет.

Также применяется посев на среды Клиглера или Олькеницкого. (см. питательные среды) – место посева в культуру почернеет.

Протеолитические свойства (гидролиз казеина)

Обезжиренное молоко диализуют для удаления лактозы, которая ингибирует гидролиз казеина. В расплавленный питательный агар с двойной концентрацией агар-агара добавляют равный объем стерилизованного автокла-вированием диализованного молока. Исследуемую культуру бактерий засевают «штрихом» на поверхность питательной среды, разлитой в чашки Петри. Посевы инкубируют до 14 сут. Перед учетом результатов поверхность среды заливают 10%-м раствором соляной кислоты. Положительный результат — просветление среды вокруг колоний.

Восстановление нитратов (денитрификация)

Диссимиляционное восстановление нитрата является процессом анаэробного дыхания, то есть использования нитратов и продуктов их частичного восстановления вместо кислорода для окисления веществ (у разных микроорганизмов как органических, так и минеральных) в

ходе метаболизма с выделением энергии. Стадии:

Катализируют реакции нитратредуктаза, NO-образующая нитритредуктаза, редуктаза окиси азота и редуктаза закиси (гемиоксида) азота соответственно.

Восстановление нитратов в нитриты (денитрификация)

Культуру микроорганизма засевают в МПБ, содержащий 0,2 % нитрата калия, инкубируют 48...72 ч, затем в опытную и контрольную пробирки добавляют по 1 мл реактива с крахмалом (растворимый крахмал — 1 г, вода дистиллированная — 100 мл, йодид калия —0,5 г). К этому раствору перед постановкой реакции добавляют несколько капель 10%-го раствора соляной кислоты. Положительный результат— темно-синее окрашивание.