Определение количества антиген-
связывающих центров в конъюгате
Антивидовые Ig G
Коллоидное |
Ig G |
|
золото |
||
Определение |
||
|
свободных Ig G в ИФА
|
Отбор |
Центрифуги- |
надосадочной |
рование |
жидкости |
Sotnikov D.V., Radchenko A.S., Zherdev A.V., Dzantiev B.B. Eurasian Journal of Analytical Chemistry. 2016, v. 11, N 3, pp. 169-179.
Зависимость концентрации IgG человека, связавшихся с конъюгатом ЗНЧ-sIgG, от исходно добавленной
mkg/mL |
10 |
|
|
|
|
|
8 |
|
|
|
|
|
|
, |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
) bound |
6 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
C (hIgG |
4 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
0 |
10 |
20 |
30 |
40 |
50 |
|
|
C (hIgG) initial, mkg/mL |
|
|||
Вывод :
Соотношение концентраций связавшихся hIgG и sIgG в конъюгате равно 0,24.
То есть занятыми оказались лишь 12% потенциальных
Определение специфических антител (серодиагностика)
Схема анализа
Моделирование кинетики образования окрашенного комплекса в традиционной схеме анализа
A + P ↔ AP AP + R ↔ APR A + R ↔ AR
P + AR ↔ APR
А– Ig G в пробе;
Р– центры связывания Ig G на частицах коллоидного золота;
R– иммобилизованный антиген;
AP – комплекс Ig G с частицами коллоидного золота;
AR – комплекс специфических Ig G с антигеном;
APR – комплекс специфических Ig G с частицами коллоидного золота и антигеном;
X – доля специфических Ig G
Кинетическое уравнение
APR = k2*R0*P0 × (1-exp(-k3*A0*X*t1)
k3*A0
Sotnikov, D. V., Zherdev, A. V., & Dzantiev, B. B. (2017). Analytical Chemistry, 89(8), 4419-4427.
Влияние константы диссоциации на изменение окраски в аналитической зоне
Влияние концентрации антител на интенсивность окраски аналитической зоны
|
7 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
6 |
~ |
|
|
|
|
|
|
|
|
5 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
nM |
4 |
|
|
|
|
|
|
|
|
[APR], |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
3 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
2 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
1 |
|
|
Диапазон применимости модели |
|
||||
|
|
0,0 |
0,1 |
0,2 |
0,3 |
0,4 |
0,5 |
0,6 |
0,7 |
|
|
|
|
|
[A]0, mM |
|
|
|
|
Влияние концентрации антител на интенсивность окраски аналитической зоны
|
|
|
1/Разбавление сыворотки |
|
|
|
|||||
|
7 |
0,0 |
0,1 |
|
0,2 |
0,3 |
|
0,4 |
0,5 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
200 |
ед |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||
|
6 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
180 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
5 |
|
|
|
|
|
|
|
|
160 |
|
[APR], nM |
|
~ |
|
|
|
|
|
|
|
окраски |
аналитическойзоны,усл. |
4 |
|
|
|
|
|
|
|
140 |
|||
|
|
|
|
|
|
|
|
||||
3 |
|
|
|
|
|
|
|
120 |
|||
|
|
|
|
Эксперимент |
100 |
||||||
|
|
|
|
|
|||||||
2 |
Теория |
|
|
|
|
80 |
|||||
1 |
|
Диапазон применимости модели |
|
Интенсивность |
|||||||
|
|
|
|
60 |
|
||||||
|
|
0,0 |
0,1 |
0,2 |
0,3 |
0,4 |
0,5 |
0,6 |
0,7 |
|
|
|
|
|
|
|
[A]0, mM |
|
|
|
|
|
|
Определение специфических IgG против антигенов микобактерии по «обратной» схеме
«Обратная» схема анализа
Моделирование кинетики образования окрашенного комплекса в «обратной» схеме анализа
|
А |
– Ig G в пробе; |
|
A + P ↔ AP |
|||
Р |
– антиген на частицах коллоидного золота; |
||
AP + R ↔ APR |
R |
– иммобилизованный Ig G –связывающий |
|
|
белок; |
||
|
AP |
– комплекс специфических Ig G с антигеном; |
|
A + R ↔ AR |
AR |
– комплекс Ig G с Ig G –связывающим белком; |
|
|
APR |
– комплекс специфических Ig G с меченым |
|
P + AR ↔ APR |
|
антигеном и Ig G –связывающим белком; |
|
X |
– доля специфических Ig G |
||
|
Кинетические уравнения
Данные уравнения также описывают кинетику комплексообразования в «сэндвич»-формате ИХА при x=1
1
2
Время анализа, сек
1 – традиционная схема, 2 – «обратная» схема