МЕТОДИЧЕСКАЯ РАЗРАБОТКА №9

ТЕМА: Вирусы бактерий - бактериофаги. Выделение бактериофагов из разных объектов, установление вида, титра. Лизогения. Применение бактериофагии в науке, медицине, народном хозяйстве

МОТИВАЦИОННАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА: Феномен бактериофагии имеет важное общебиологическое значение и может быть использован в разных областях науки и практики:

• в теоретических медико-биологических исследованиях;

• для диагностики инфекционных заболеваний - прямой и вспомогательный способы (фаготипирование позволяет установить источник инфекции);

• для профилактики и лечения инфекционных заболеваний, санации объектов и окружающей среды;

• для индикации экологического неблагополучия;

• как фактор изменчивости бактерий при получении вакцин.

Знания о профилактических и лечебных возможностях бактериофагов могут обогатить набор средств, используемых хирургами, педиатрами, окулистами, отоларингологами, терапевтами, инфекционистами. В отличие от химиопрепаратов бактериофаги абсолютно безвредны.

УЧЕБНАЯ ЦЕЛЬ:

Общая:

• продемонстрировать значение феномена бактериофагии в теоретических исследованиях, в диагностике, профилактике, лечении инфекционных болезней, в освоении космоса, приготовлении вакцин, в народном хозяйстве.

Конкретная:

1. Научить (на уровне умения):

- идентифицировать неизвестный бактериофаг и с его помощью – культуру бактерий;

- определять вирулентность, титр фага;

- методам и принципам лечебно – профилактического использования бактериофага.

2. Познакомить с принципами постановки реакции нарастания титра бактериофага и ее применением.

ВОПРОСЫ ДЛЯ ПОДГОТОВКИ И ВВОДНОГО КОНТРОЛЯ

1. История открытия и изучения бактериофагов, феномена бактериофагии.

2. Современные представления о природе бактериофага.

3. Особенности морфологии и ультраструктуры бактериофага.

4. Особенности репродукции бактериофага (механизм взаимодействия с бактериальной клеткой).

5. Валентность, вирулентность бактериофага, их определение.

6. Продуктивная фаговая инфекция. Определение путем титрования на плотных и жидких питательных средах.

7. Бактериофаги с умеренной вирулентностью. Понятие о лизогении, лизогенных культурах, трансдукции, лизогенной конверсии. Их значение для науки и практики.

8. Значение феномена бактериофагии в практической деятельности врача и для медицины в целом.

9. Значение бактериофагии для народного хозяйства.

Методические указания по выполнению практической работы с полным регламентом протокола к занятию

№ п/п	Наименование учебного элемента	Методическое решение	Регламент протокола
1.	Строение бактериофага, назначение структурных элементов	Учебник, учебные пособия	Зарисовать при самоподготовке дома
2.	Выделение и идентификация бактериофага из объектов окружающей среды	Приложение 1	Зарисовать при самоподготовке дома
3.	Титрование бактериофага	Приложение 2	На занятии поставить реакцию, учесть готовую
4.	Фагодиагностика и фаготипирование	Приложение 3	На занятии поставить реакцию, учесть готовую
5.	Применение бактериофагов в медицине и народном хозяйстве	Приложение 4	Записать в протокол и заполнить
6.	Биопрепараты бактериофага	Приложение 5	На занятии классифицировать предложенные препараты
7	Назначение лизогенных бактерий	Приложение 6	Записать в протокол
8	Тестовый контроль усвоения	Приложение 7	Записать в протокол.

Приложение 1

Выделение и идентификация бактериофагов

1. Выделение бактериофага из патологического материала больного:

• материал профильтровать через бумажный фильтр, освободить от грубых примесей;

• профильтровать первичный фильтрат через бактериологический фильтр, освободить его от бактерий.

2.Обнаружение бактериофага в материале от больного по методу Отта на плотных питательных средах.

1,5 % МПА разливают в чашки Петри, после его застывания засевают бактерии, предположительно гомологичные искомому фагу.

Для получения сплошного роста 2-3 капли культуры, нанесенные в центре чашки, растирают стерильным шпателем равномерно по всей поверхности. Спустя 5-10 минут после посева на подсушенную среду наносят каплями исследуемый материал с предполагаемым бактериофагом. После того, как жидкость впитается в среду, чашки Петри переворачивают вверх дном, ставят в термостат при +37 С⁰ на 18-24 часа. Учет результатов: о присутствии фага свидетельствует полное отсутствие роста культуры на месте нанесения фильтрата.

3. Обнаружение и титрование бактериофага на плотных средах двухслойным методом Грациа.

1,5 % МПА по 30 мл разлить в чашки Петри. После застывания, в течение 2 часов его подсушивают при +18 С.

В пробирку с 2,5 мл 0,7% расплавленного и остуженного агара добавить 0,1 мл

густого смыва суточной агаровой культуры и столько же фильтрата бактериофага Содержимое пробирки перемешать и вылить на первый слой МПА в чашку Петри. После того, как второй слой застынет, чашку поставить в термостат при + 37 С

на 8-10 часов.

Присутствие фага определяют по прозрачным пятнам на мутном матовой фоне глубинного роста бактерий.

Приложение 2