- •Методические рекомендации для преподавателей
- •9.Учебно-материальное обеспечение:
- •Методы микробиологического исследования при бруцеллезе
- •1. Материал исследования:
- •2. Методы исследования:
- •Дифференциация видов бруцелл по биохимической активности
- •Микробиологическая диагностика туляремии
- •I. Бактериологический метод:
- •II. Биологический метод:
- •II этап
- •Биохимическая активность:
- •Специфические лечебно-профилактические средства, применяемые при
Микробиологическая диагностика туляремии
I. Бактериологический метод:
Материал для исследования:содержимое бубона, отделяемое кожной язвы, конъюнктивы, зева, кровь, мокрота, ткани и органы трупа человека, грызунов, животных, объекты внешней среды.
1 день: Обработка Мазки-отпечатки Заражение
иммунолюминесцентной Окраска по Граму морской свинки
сывороткой (РИФ, РНИФ)
3-5 дни: Патанатомическое мазки-отпечатки Посев на среду Посев на МПА
исследование органов Окраска по Граму Мак-Коя (нет роста).
(желточная среда)
6-7 дни: Мазок Реакция агглютинации Изучение биохимической
Окраска с туляремийной активности проводят редко
по Граму диагностической (среды Гисса непригодны.
сывороткой Используют монометрический
метод Варбурга).
Бактерии туляремии расщепляют до кислоты гл, мл
Образуют Н2S.
II. Биологический метод:
подкожное или внутрибрюшинное заражение мышей, морских свинок:
- патанатомическое исследование (увеличение миндалин, органов РЭС и т.д.);
- мазки – отпечатки, микроскопия;
- посев на питательные среды.
III. Серологический метод:
чаще используют для ретроспективной диагностики реакции:
- агглютинации (диагностический титр у детей 1:100),
- гемагглютинации (титры 1:1280 – 1:1560),
- кровяно-капельную реакцию Минкевича,
- реакцию преципитации.
IV. Аллергологический метод:
0,1 мл тулярина вводится строго внутрикожно.
Для контроля – 0,1 мл 0,9% физиологического раствора.
Учет результатов через 24-48 часов.
Приложение 6
Лабораторная диагностика чумы
1. Материал для исследования
Содержимое бубонов, язв,кровь, СМЖ, мокрота, испражнения, трупный материал(грызунов, людей), блохи.
2. Методы исследования
1. Микроскопический (окраска по Граму, РИФ).
2. Микробиологический с выделением культуры и её идентификацией.
3. Биологический с заражением чувствительных животных (мыши, крысы).
4. Иммунологический: РА, РНГА, РИФ, ИФА.
5. Аллергологический метод применяется invivo,invitro
а) Используется при ДСЛ в виде внутрикожной пробы с аллергеном, полученным из псевдотуберкулезного микроба. Это специфический аутолизат или препарат из его клеточной стенки. Положительная реакция начинает проявляться с 4-7 дня болезни и сохраняется до 5 месяцев. Это реакция in vivo на больных.
б) Аллергеном – псевдотуберкулином пользуются так же для реакции повреждаемости нейтрофилов больного invitro.
Приложение 7
Схема бактериологического выделения возбудителя чумы
I этап. Бактериоскопия Отделяемое язвы, бубона,
(грамотрицательные мокрота, кровь, кал, грызуны,
коккобациллы и палочки) насекомые, трупы
Биопроба
Иммунофлюоресценция (втирание)
РИФ (АТ) МПБ
II этапБактериоскопия Среда Туманского-
МПА Коробковой
Биопроба
По Граму Подвижность Бактериоскопия РНГА
III этапБактериоскопия ИФА
РИФ Иммуно-
флюоросценция
РА РНГА
а)Чувствительность к б)Определение
антибиотикам фаговара
_________________________________________________________________
в) Биохимическая активность (углеводов)
+ Глюкоза + Левулеза ± Сорбит
+ Мальтоза - Сахароза ± Декстрин
+ Галактоза - Рафиноза ± Лактоза
+ Маннит - Инулин ± Глицерин
+ Маноза - Дульцит ± Рамноза
+ Сорбоза ± Инозит
IV этап. Анализ полученных результатов и заключение.
Примечание: В связи с высокой энергией роста Y. pestis все этапы могут пройти в течение суток. Поэтому учет результатов следует проводить многократно, каждые 4-8 часов. Заключение дается на основе совокупности всех признаков.
Приложение 8
Питательные среды для иерсиний
Среда Клиглера содержит три сахара: глюкозу, сахарозу, лактозу, МПА, индикатор-феноловый красный.
Среда Эндо – МПА, глюкоза, лактоза, индикатор – фуксин.
Среда Левина – МПА, лактоза, индикатор – эозин с метиленовым синим.
Среда Серова Г.Д. – глюкоза, мочевина, желчь, конго красный, генциановый фиолетовый, МПА, молибденовокислый аммоний.
Среда обогащения – фосфатно-буферный раствор.
Реакция Фогес-Проскауэра – В среду Кларка засевают культуру, затем добавляют креатинин / альфа-нафтол с КОН/ В положительном случае бульон окрашивается в розовый цвет.
Среда Кларка – МПБ, 1% глюкозы, К2НРО4.
Среда Бессоновой жидкая голодная с рамнозой.
Среда Бессоновой плотная – 3% голоднокислый агар.
Среда Туманского-Коробковой с рамнозой.
Приложение 9
Схема бактериологического выделения возбудителей иерсиниозов
I этап Испражнения, кровь,
рвотные массы, желчь,
По Граму Подвижность дуоденальное содержимое, моча, секционный материал.
Среда обогащения
Среда Эндо Среда Серова