2. Микрофлора воды и ее значение для здоровья человека. Принципы санитарно-бактериологического анализа и оценки. Способы очистки воды от микробов.

Вода — естественная среда .обитания микробов, основная масса которых поступает из почвы, воздуха с оседающей пылью, с отбросами, стоками, мочой и т. д.

К постоянно живущим в воде микроорганизмам относятся Azotobacter, Nitrobacter, Micro-coccus roseus, Pseudomonas fluorescens, Bact. aquatalis, Proteus vulgaris, Spirillum и др. Кроме сапрофитов в воде могут быть возбудители инфекционных болезней животных и человека.

Загрязненность воды определяется по общей микробной обсемененности и обнаружению санитарно-показательных микроорганизмов — индикаторов наличия выделений человека или животных. В воде регистрируют кишечную палочку, БГКП (колиформные палочки), энтерококк, стафилококки;

На основании количественного выявления этих санитарно-показательных бактерий вычисляются индекс БГКП (число БГКП в 1 л воды), перфрингенс-титр, титр энтерококка и т.д. Так, например, титр энтерококка воды — это наименьшее количество воды, в котором определяется энтерококк.

К бактериям группы кишечной палочки относят грамотрицательные палочки, сбраживающие с образованием кислоты и газа лактозу или глюкозу при температуре 37°С в течение 24-48 ч и не обладающие оксидазной активностью. Наиболее часто этот показатель применяют как индикатор фекального загрязнения воды. Другой сходный показатель фекального загрязнения — общие колиформные бактерии: грамотрицательные, оксида-заотрицательные палочки, ферментирующие лактозу или маннит (глюкозу) с образованием альдегида, кислоты и газа при температуре 37°С в течение 24 часов. Вместо последнего термина предлагается использовать термин «бактерии семейства Enterobacteriaceae», так как все бактерии этого семейства имеют индикаторное значение. К бактериям семейства Enterobacteriaceae относятся грамотрицатель¬ные, оксидазаотрицательные палочки, расту¬щие на лактозосодержащих средах типа среды Эндо и ферментирующие глюкозу до кислоты и газа при температуре 37°С в течение 24 часов; колиформные бактерии (палочки).

При бактериальном загрязнении воды свыше допустимых норм следует провести дополнительное исследование на наличие бактерий — показателей свежего фекального загрязнения. К таким бактериям относят термотолерантные колиформные бактерии, фекальные кишечные палочки, ферментирующие лактозу до кислоты и газа при температуре 44 °С в течение 24 часов и не растущие на нитратной среде. О свежем фекальном загрязнении свидетельствует также выявление энтерококка. На давнее фекальное загрязнение указывают отсутствие БГКП и наличие определенного количества клостридии перфрингенс, т. е. наиболее устойчивых спорообразующих бактерий.

В соответствии с нормативными документами регламентируются следующие нормативы микробиологических показателей питьевой воды при централизованном водоснабжении:

1. Общее микробное число воды не должно пре¬вышать 100 микробов в 1 мл исследуемой воды;

2. Общие колиформные бактерии должны от¬сутствовать в 100 мл исследуемой воды;

3. Термотолерантные колиформные бактерии должны отсутстовать в 100 мл исследуемой воды;

4. Колифаги не должны определяться в 100 мл исследуемой воды (учет по бляшкооб-разующим единицам);

5. Споры сульфитредуцирующих клостридий не должны определяться в 20 мл исследуемой воды;

6. Цисты лямблий не должны определяться в 50 мл исследуемой воды.

Кроме того, загрязненность воды оценива¬ется по обнаружению патогенных микробов с фекально-оральным механизмом переда¬чи (энтеровирусы, энтеробактерии, холерные вибрионы и др.).

Вода – жизнь, не стоит спорить с данным утверждением. Человек состоит на 90% из воды, поэтому она является одним из важных ключей здорового образа жизни. Ценить и беречь воду необходимо, но также следует знать, что вода является средой обитания для многих других организмов, которые могут быть опасны для человека. В природе не существует идеально чистой воды, в любом состоянии в ней кишат микробы, бактерии, другие живые существа. Помимо этого, вода содержит тяжелые металлы, соли, илистые соединения, песок. Использовать неочищенную воду в быту смерти подобно, хотя многие придерживаются иной точки зрения. Употребление неочищенной воды может привести к ухудшению здоровья, вывести из строя бытовую технику, а также убить инженерные системы дома. Поэтому сегодня все больше уделяется внимание к современным методам очистки воды, которые позволяют утверждать с точностью на 95%, что вода не содержит вредных веществ. Рассмотрим современные и классические методы очистки воды от микроорганизмов.

Озонирование воды. Метод очистки, озонирования воды пользуется большой популярностью в странах Старого Света и Северной Америки. Принцип очистки основан на технологии насыщения воды азотом. Молекулы азота проникают в клеточную мембрану микроорганизмов, вызывают окисление, убивают их наповал. Помимо того, технология позволяет избавить воду от неприятного запаха, улучшить вкусовые качества. Стоимость технологии невысока, поэтому данный метод очистки воды от микроорганизмов интересует многих специалистов России и стран СНГ.

Обработка ультрафиолетом. Метод водоочистки путем действенного применения ультрафиолета считается самым безопасным. Принцип технологии предполагает использование ультрафиолетовых лучей для последующей обработки воды. Коротко говоря, жидкость проходит через ультрафиолетовую мембрану, она действует губительно на микроорганизмы, находящиеся в воде. Преимущества данного метода:

• безопасность и экологически чистый принцип;

• использование недорогого оборудования;

• химический состав и вкусовые качества воды остаются неизменными;

• мобильность установки, компактность;

• процесс водоочистки занимает минимум времени.

Отметим, что использование метода обработки воды ультрафиолетом в домашних условиях практически невозможно, поэтому еще чаще применяют на заводах и предприятиях.

Обратный осмос. Очистка воды от микроорганизмов методом обратного осмоса была разработана в ХХ веке. Первоначально ее применяли для опреснения морской воды, но результат был настолько ошеломляющим, что сегодня практически все используют данный метод очистки воды. В настоящее время большинство водоочистных установок домашнего пользования применяют данную технологию. Принцип работы прост: жидкость проходит через полупроницаемую мембрану, которая пропускает только молекулы воды. Микроорганизмы, соли, ржавчина, иные загрязнения застревают в фильтрующем элементе. Некоторые ученые предполагают, что технология также очищает воду от полезных для человека веществ. Спорить с утверждением не стоит, это так, но если не брать во внимание данный факт, обратный осмос является самым эффективным способом очистки воды от микроорганизмов.

Йодирование воды. Данная технология водоочистки используется при наличии большого объема воды. Чаще ее применяют в бассейнах, общественных водоемах. Йодирование – один из быстрых способов очистки. Метод активно применяют в полевых условиях, на озерах, родниках. Сегодня компании производители предлагают специальные таблетки йода, которые необходимо поместить в емкость с водой, дождаться полного растворения, безбоязненно употреблять воду в пищу.

Очистка серебромОдин из древнейших способов очистки воды основан на использовании серебряной посуды. В древности воду хранили в серебряных сосудах, использовали различные серебряные предметы: ложки, монеты, украшения. Принцип очистки основан на реакции ионов серебра и оболочки бактерий, последние из которых погибают. Но часто использовать данный метод нельзя, серебро является тяжелым металлом, поэтому вода, наполняясь частицами вещества, попадает в организм человека, где может вызвать расстройство и ухудшение здоровья. Поэтому длительное употребление очищенной воды от микроорганизмов таким способом не рекомендуется.

3. У новорожденного обнаружен конъюнктивит с гнойным отделяемым. Мать практически здорова, но в ее анамнезе – воспаление придатков матки. Что можно заподозрить и как установить этиологию заболевания у ребенка и матери?

Диагностика: бактериоскопический метод, в мазках, окрашенных по Граму должен быть грам – диплококки бобовидной формы, в мазке, окрашенном метиленовым синим картина незавершенного фагоцитоза. Если в мазке много грам- бактерий, то применяют РИФ.

ЭКЗАМЕНАЦИОННЫЙ БИЛЕТ № 78

1. Стрептококки и заболевания, вызываемые ими.

Стрептококки.

Царство: Бактерии

Тип: Firmicutes

Класс: Bacilli

Порядок: Lactobacillales

Семейство: Streptococcaceae

Род: Стрептококк

Стрептококки впервые выделил из тканей людей, больных рожей, и при раневых инфекциях в 1874 г. Т. Бильрот, а описали при сепсисе Л. Пастер в 1879 г. и А. Огстон в 1881 г. Чистую культуру стрептококков выделили и изучили Ф. Фелейзен (1883) и А. Розенбах (1884).

Стрептококки (Streptococcus) — возбудители большого числа инфекций человека и животных, они вызывают рожистое воспаление, сепсис и гнойные инфекции, скарлатину, ангину. Имеются непатогенные разновидности, обитающие в полости рта и кишечника человека. В некоторых случаях они вызьшают хронические воспалительные процессы и являются возбудителями раневых инфекций.

В семейство Streptococcaceae входит семь родов, из которых для человека наибольшее значение имеют стрептококки (род Streptococcus) и энтерококки (род Enterococcus). Наиболее значимые виды - S.pyogenes (стрептококки группы А), S.agalactiae (стрептококки группы В), S.pneumoniae (пневмококк), S.viridans (зеленящие стрептококки, биогруппа mutans), Enterococcus faecalis.

Существует ряд классификаций стрептококков. Наиболее проста классификация, основанная на особенностях роста этих микроорганизмов на агаре с кровью барана (по отношению к эритроцитам).

Современная классификация стрептококков основана на их серологических различиях. Известно 17 серологических групп:А, В,С, D, E, F и т. д. Деление на группы основано на наличии у представителей разных групп специфического полисахарида (субстанция С). Патогенны для человека стрептококки группы А. Стрептококки разных групп отличаются не только поспособности вызывать заболевания у человека и животных и по своему природному обитанию, но и по биохимическим и культуральным особенностям.

Морфология. Стрептококки представлены неподвижными сферическими грамположительными клетками размером 0,5-2,0 мкм. В мазках они располагаются парами или короткими цепочками, что и послужило основанием для их названия [от греч. streptos, цепочка, + kokkos, ягода]. Клеточная стенка содержит тейхоевые кислоты, белки (М-, Т- и R-антигены), углеводы и пептидогликаны, на её поверхности расположены фимбрии, а у патогенных видов имеется капсула, состоящая из гиалуроновой кислоты. При неблагоприятных воздействиях стрептококки способны образовывать L-формы. Стрептококки — факультативные анаэробы.

Характерные особенности стрептококков — отсутствие каталазной активности и способность большинства видов лизировать эритроциты.

Культуральные свойства. Возбудители растут на средах, обогащенных углеводами, кровью, сывороткой, асцитической жидкостью. Оптимум температуры +37о С, рН - 7,2-7,6. На плотных средах обычно образуют мелкие серые колонии. Капсульные штаммы стрептококков группы А образуют слизистые колонии. На жидких средах стрептококки обычно дают придонный, часто поднимающийся по стенкам рост. Стрептококки — факультативные анаэробы. По характеру роста на кровяном агаре они делятся на культуральные варианты: а-гемолитические (зеленящие превращение окси- в метгемоглобин ), в-гемолитические (полный гемолиз) и негемолитические.

Общепринятые среды для выращивания: мясо-пептонный агар с добавлением крови кролика или барана, полужидкий агар с сывороткой. (Чаще применяют сахарный бульон и кровяной агар, содержащий 5% дефибринированной крови.)

Антигены. Современная классификация основывается на опре-делении антигенной структуры стрептококков, позволяющей под-разделить все стрептококки на 17 серологических групп, обозна-чаемых латинскими буквами в порядке алфавита. Практический интерес представляют серогруппы А, В, С, D, E, F. Группа А -- возбудители большого числа инфекций у человека; группа В -- возбудители мастита у коров; группы В, С, D, Е -- возбудители инфекций у животных разных видов. Антигеном, который позволяет разделить стрептококки на серогруппы, является полисахарид (С-вещество), входящий в состав клеточной стенки стрептококков. Химическая природа стрептококковых антигенов неодинакова. В группе А ими являются белковые антигены М, R и Т.

Стрептококки имеют перекрестно - реагирующие антигены с антигенами клеток базального слоя эпителия кожи, эпителиальных клеток корковой и медуллярной зон тимуса. В клеточной стенке стрептококков обнаружен также антиген (рецептор II), способный взаимодействовать с Fс- фрагментом IgG.

Токсинообразование. Патогенные стрептококки продуцируют экзотоксины различного действия. Гемолизин обусловливает разрушение эритроцитов, лей-коцитов, тромбоцитов, макрофагов; при внутривенном введении кроликам вызывает гемоглобинемию и гематурию. Лейкоцидин разрушает лейкоциты или угнетает их фа-гоцитарные свойства. Летальный токсин (некротоксин) при внут-рикожном введении кролику вызывает некроз. Некротическому действию могут подвергаться паренхиматозные органы и другие ткани. Кроме экзотоксинов патогенные стрептококки продуцируют ферменты гиалуронидазу, фибринолизин, дезоксирибонуклеазу, ри-бонуклеазу, нейраминидазу, протеиназу, стрептокиназу, амилазу, липазу.

Факторы патогенности стрептококков.

1. Белок М- главный фактор. Определяет адгезивные свойства, угнетает фагоцитоз, определяет типоспецифичность, обладает свойствами суперантигена. Антитела к М- белку обладают протективными свойствами.

2. Капсула - маскирует стрептококки за счет гиалуроновой кислоты, аналогичной гиалуроновой кислоте в тканях хозяина.

3. С5а - пептидаза - расщепляет С5а - компонент комплемента, чем снижает хемоатрактивную активность фагоцитов.

4. Стрептококки вызывают выраженную воспалительную реакцию, в значительной степени обусловленную секрецией более 20 растворимых факторов - ферментов (стрептолизины S и О, гиалуронидаза, ДНК- азы, стрептокиназа, протеазы) и эритрогенных токсинов.

Эритрогенин - скарлатинозный токсин, обусловливающий за счет иммунных механизмов образование ярко красной скарлатинозной сыпи. Выделяют три серологических типа этого токсина (А,В и С). Токсин обладает пирогенным, аллергенным, иммуносупрессивным и митогенным действием.

Серологические серотипы: методом агглютинации на стекле штаммы бета-гемолитического стрептококка, выделенного при скарлатине и других стрептококковых инфекциях и от здоровых носителей, были разделены на 50 серологических типов. Культуры 46 типов отнесены к группе А, типы 7, 20, 21 — к группе С и тип 16 — группе Г.

Деление стрептококков на типы производится и с помощью реакции преципитации. Результаты определения типа по реакции агглютинации и в реакции преципитации обычно дают совпадающие результаты. При скарлатине обычно преобладает

1 или 2—3 типа. Обнаружены общие антигенные субстанции в штаммах, принадлежащих к группам А, С, Q.

В стрептококковом (при скарлатине) токсине содержатся

2 фракции:

• термолабильная или истинный скарлатинозный токсин;

• термостатическая, которая обладает свойствами аллергена.

Истинный эритрогенный токсин является протеином. Это экзотоксин стрептококка, который вызывает реакцию Дика у восприимчивых к скарлатине людей. Очищенный эриторгенный токсин применяют для кожных проб с целью определения уровня антитоксического иммунитета (реакция Дика).

Эпидемиологические особенности. Основными источниками являются больные острыми стрептококковыми инфекциями (ангина, пневмония, скарлатина), а также реконвалесценты. Механизм заражения - воздушно - капельный, реже - контактный, очень редко - алиментарный.

Клинико - патогенетические особенности. Стрептококки - обитатели слизистых верхних дыхательных путей, пищеварительного и моче - полового трактов, вызывают различные заболевания эндо- и экзогенного характера. Выделяют локальные (тонзиллит, кариес, ангины, отиты и др.) и генерализованные инфекции (ревматизм, рожистое воспаление, скарлатина, сепсис, пневмония, стрептодермии и др.). Развитие тех или иных форм зависит от ряда условий, в т.ч. от входных ворот, различных факторов патогенности, состояния иммунной системы (особую роль играют антитоксины и типоспецифические М- антитела).

Особое положение в роде Streptococcus занимает вид S.pneumoniae (пневмококк) - этиологический агент крупозной пневмонии, острых и хронических воспалительных заболеваний легких. От остальных стрептококков отличается морфологией (чаще диплококки в форме пламени свечи, плоскими концами друг к другу, обладают выраженной капсулой), антигенной специфичностью (имеют 83 серовара по капсульному полисахаридному антигену), высокой чувствительностью к желчи и оптохину, вызывают альфа - гемолиз. Главный фактор патогенности - полисахаридная капсула.

Скарлатину вызывают различные серотипы бета - гемолитических стрептококков, обладающих М- антигеном и продуцирующих эритрогенин (токсигенные стрептококки серогруппы А). При отсутствии антитоксического иммунитета возникает скарлатина, при наличии - ангина.

Резистентность. Стрептококки чувствительны к физическим и химическим факторам окружающей среды (включая дезинфектанты), но могут длительно сохранять жизнеспособность при низких температурах. Устойчивость к антибиотикам приобретается медленно.

Лабораторная диагностика. Основной метод диагностики - бактериологический. Материал для исследования - кровь, гной, слизь из зева, налет с миндалин, отделяемое ран. Решающим при исследовании выделенных культур является определение серогруппы (вида). Группоспецифические антигены определяют в реакции преципитации, латекс - агглютинации, коагглютинации, ИФА и в МФА с моноклональными антителами (МКА). Серологические методы чаще используют для диагностики ревматизма и гломерулонефрита стрептококковой этиологии - определяют антитела к стрептолизину О и стрептодорназе.

Патогенность. На основе полисахаридного антигена делятся на серогруппы (А, В, С...О). Стрептококки группы А вырабатывают более 20 веществ, обладающих антигенностью и агрессивностью. На поверхности клетки имеется белковый антиген М, который тесно связан с вирулентностью (препятствует фагоцитозу). Этот белок определяет типовую принадлежность стрептококков. К факторам патогенности относят стрептокиназу (фибринолизин), ДНКазу, гиалуронидазу, эритрогенин. Наиболее патогенны для человека гемолитические стрептококки группы А, называемые S. pyogenes. Этот вид вызывает у человека многие болезни: скарлатину, рожу, ангину, острый эндокардит, послеродовой сепсис, хронический тонзиллит, ревматизм.

Иммунитет: постинфекционный нестойкий, ненапряженный.

Микробиологическая диагностика. Материал для исследования – гной, моча, кровь, мокрота.

Бактериоскопический метод: окраска по Граму мазков из патологического материала. При положительном результате обнаруживают цепочки грам«+» кокков.

Бактериологический метод: Исследуемый материал засевают на кровяной агар в чашку Петри. После инкубации при 37 °С в течение 24 ч отмечают характер колоний и наличие вокруг них зон гемолиза. Из части материала, взятого из колоний, готовят мазок, окрашивают по Граму и микроскопируют. Для получения чистой культуры 1—3 подозрительные колонии пересевают в пробирки со скошенным кровяным агаром и сахарным бульоном. На кровяном агаре Streptococcuspyogenes образует мелкие мутноватые круглые колонии. В бульоне стрептококк дает придонно-пристеночный рост в виде хлопьев, оставляя среду прозрачной. По характеру гемолиза на кровяном агаре стрептококки делятся на три группы: 1) негемолитические; 2) а-гемолитические 3) ?-гемолитические, образующие вокруг колонии полностью прозрачную зону гемолиза. Заключительным этапом бактериологического исследования является идентификация выделенной культуры по антигенным свойствам. По данному признаку все стрептококки делят на серологические группы (А, В, С, D и т. д.). Серогруппу определяют в реакции преципитации с полисахаридным преципитиногеном С. Серовар определяют в реакции агглютинации. Выявленную культуру стрептококка проверяют на чувствительность к антибиотикам методом дисков.

Серодиагностика: устанавливают наличие специфических антигенов в крови больного с помощью РСК или реакции преципитации. Антитела к О-стрептолизину определяют для подтверждения диагноза ревматизма.

Лечение: Антибиотики широкого спектра действия (пенициллины, устойчивые к в-лактамазе). При выделении стрептококка А – пенициллин. Химиотерапия антибиотиками, к которым выявлена чувствительность микроба – левомицетин, рифампицин.

Профилактика: специфической – нет. Неспецифическая - выявление, лечение больных; проведение планового обследования медперсонала, вакцинация стрептококковый бактериофаг (жидкий) – фильтрат фаголизата стрептококка. Применятся наружно, внутрикожно, в/м., О-стрептолизин сухой (лиофильно высушенный фильтрат бульонной культуры стрептококка – активного продуцента О-стрептолизина. Применяется для постановки серологических реакций – определения анти-О-стрептолизина в сыворотке крови больных).