3.1.4. Распределение gdnf у линий дрозофилы с полиморфизмом по гену limk1 после теплового шока
Для моделирования стрессорной ситуации мы использовали ТШ. Рассмотрим распределение GDNF в нервно-мышечных контактах линии дикого типа Canton-S после воздействия ТШ (рис. 34).
Под действием ТШ у Canton-S происходит накопление GDNF в мышечных клетках и вдоль нейритов, в глиальных клетках и в НМК. Окрашивание структурное, возможно, это небольшие скопления белковых молекул. Вокруг ядер, как мышечных, так и глиальных клеток наблюдали накопление белка.
Рис. 34. Локализация GDNF в нервно-мышечных контактах у линии Canton-S после воздействия ТШ. Х63. Суммарное изображение трёх слоёв – 3 мкм. Зеленый – антитела к HRP. Красный - антитела к GDNF. Merge – сводное изображение HRP и GDNF.
У линии дикого типа Berlin после действия ТШ интенсивность окраски увеличивается, следовательно, и количество белка возрастает в ответ на стресс. Район глиальных клеток менее обширен, чем зона НМК и нейрит. Ядра не окрашены.
Рис.35. Локализация GDNF в нервно-мышечных контактах у линии Berlin после воздействия ТШ. Х63. Суммарное изображение трёх слоёв – 3 мкм. Зеленый – антитела к HRP. Красный - антитела к GDNF. Merge – сводное изображение HRP и GDNF.
После действия ТШ интенсивность окраски антителами к GDNF у линии дикого типа Oregon-R увеличивается. Район глиальных клеток менее обширен, чем зона НМК и нейрит. Ядра не окрашены.
Рис. 36. Локализация GDNF в нервно-мышечных контактах у линии Oregon-R после воздействия ТШ. Х63. Суммарное изображение трёх слоёв – 3 мкм. Зеленый – антитела к HRP. Красный - антитела к GDNF. Merge – сводное изображение HRP и GDNF.
У мутантной линии agnts3 после действия ТШ GDNF локализуется в мышечных и глиальных клетках, вдоль нейритов (рис. 37). Интенсивность окраски увеличивается, следовательно, увеличивается и количество белка GDNF в ответ на ТШ. Однако общий уровень ниже, чем у дикого типа.
Рис.37. Локализация GDNF в нервно-мышечных контактах у линии agnts3 после воздействия ТШ. Х63. Суммарное изображение трёх слоёв – 3 мкм. Зеленый – антитела к HRP. Красный - антитела к GDNF. Merge – сводное изображение HRP и GDNF.
Рис. 38. Сравнение локализации GDNF в нервно-мышечных контактах у исследуемых линий после воздействия ТШ. Х63. Суммарное изображение трёх слоёв – 3 мкм. Зеленый – антитела к HRP. Красный - антитела к GDNF. Merge – сводное изображение HRP и GDNF.
Сводное изображение позволяет сделать вывод, что в нервно-мышечных контактах у линии Canton-S GDNF локализуется вокруг ядер мышечных и глиальных клеток, вдоль нейритов и в нервно-мышечных контактах, но в ядрах клеток отсутствует. Интенсивность окрашивания возрастает, т.е. увеличивается количество белка в ответ на стресс. У мутанта agnts3 после ТШ GDNF локализуется вокруг ядер мышечных, глиальных клеток и вдоль нейритов. Увеличивается интенсивность окраски, следовательно, увеличивается количество белка GDNF мутантной линии, но общий уровень ниже, чем у дикого типа. У линий дикого типа Berlin и Oregon-R после воздействия ТШ GDNF локализуется вдоль нейритов и в области НМК, с утончением района глиальных клеток. Однако у Berlin и Oregon-R интенсивность окраски антителами к GDNF повышается, то есть количество GDNF в ответ на стресс возрастает.