Ветеринарная рецептура с основами терапии и профилактики Справочник

ИСКУССТВЕННОЕ ОСЕМЕНЕНИЕ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ ЖИВОТНЫХ

В современном животноводстве искусственное осеменение надежно обеспечивает воспроизведение животных, так как позволяет использовать сперму самцов высокого качества, а также профилактирует заболевания, передающиеся при половом контакте, такие как бруцеллез, кампилобактериоз (вибриоз), туберкулез, паратуберкулез, лептоспироз, листериоз, токсикоплазмоз, трихомоноз.

Искусственное осеменение включает в себя пять основных процессов: получение спермы от производителя сельскохозяйственных животных, оценка ее, разбавление, хранение и введение в половые органы самки.

Научно-технический прогресс в совершенствовании метода искусственного осеменения, рациональное использование гормональных препаратов и других биологически активных веществ с целью регуляции и стимуляции воспроизводительной функции, а также проявления у них суперовуляции, столь необходимой при трансплантации зигот (эмбрионов), и применение электронно-вычислительной техники (ЭВМ) представляют на современном этапе развития животноводства биотехнику размножения животных.

РАСТВОРЫ, ПРИМЕНЯЕМЫЕ В ИСКУССТВЕННОМ ОСЕМЕНЕНИИ ЖИВОТНЫХ

11ри искусственном осеменении широко применяют специфические растворы. Ими обрабатывают стеклянную посуду и инструменты, используют при оценке качества спермы и ее разбавлении и др. Назначение этих растворов обусловлено их физико-химическими свойствами — обеспечивать предельную чистоту, стерильность посуды и инструмен- гов, создавать благоприятные условия для жизнедеятельности половых клеток (оптимальную реакцию среды рН, буферность, осмомолярность и др.), а также защищать спермин от воздействия неблагополучных внешних факторов (понижение температуры, явление ауто- и гетероннтоксикации). Поэтому все ингредиенты для них должны быть химически чистыми, безвредными для спермиев, не иметь примесей токсичных веществ, запаха. Хранят их в герметически закрытых емкостях с этикеткой, обозначающей наименование предприятия, выпустившего препарат, на шание и степень чистоты: ЧДА — чистый для анализа или ХЧ — химически чистый. Используемые препараты обязаны отвечать требо- ваниям Государственной фармакопеи; они должны быть проверены на

223

безвредность для спермиев. Готовят растворы только на дистиллированной воде с рН не ниже 5, лучше нейтральной реакции. Для синтетических сред дистиллированную воду желательно вторично перегнать в цельностеклянном дистиллированном аппарате. Потребность в дистиллированной воде очень велика. Для мойки посуды и инструментов лучше применять деионизированную ионообменной очисткой воду.

Предусмотренные в искусственном осеменении растворы способствуют строгому соблюдению ветеринарно-санитарных правил при осуществлении технологических приемов (получение спермы и т. д.). Их объединяют в четыре группы: 1) растворы, используемые при подготовке посуды, приборов и инструментов; 2) растворы для обеззара-

инструменты обрабатывают следующими растворами: 1 %-ным соляной кислоты (одна столовая ложка на 3 л воды), 2—3 %-ным натрия гидрокарбоната; 1 —1,5 %-ным кальцинированной соды, хромпиком и хромовой смесью.

На поверхности стеклянных предметов, при изготовлении которых используется речной песок, часто остается заводская примесь в виде соединений кремниевых кислот (силикаты), токсичных для спермиев. Чтобы освободиться от них, все предметы моют в проточной воде и выдерживают 24 ч в растворе соляной кислоты, затем тщательно промывают обычной водой (водопроводной или колодезной) и 2—3 раза ополаскиваются дистиллированной водой.

Растворы гидрокарбонатов (2—3 %-ные) и карбонатов натрия (1 —1,5 %-ные) при температуре 35—40 °С обладают моющими свойствами. Кроме стекла, ими тщательно моют также предметы из резины (цилиндры, камеры, кольца, спермоприемники, катетеры).

Сильно загрязненную посуду и инструменты обрабатывают раство-

224

вора при определении активности спермиев.

Предлагаемые растворы изотоничны для спермиев, имеют нейтральную или щелочную среду. Поэтому удобно ими пользоваться при определении активности спермиев в свежеполученной сперме барана, быка или самцов птицы, если она густая. При оценке сохраняемой разбавленной спермы правильнее употреблять растворы гидрокарбонатов и цитратов. Их можно использовать при подготовке шприца-катетера или микрошприца, предназначенных для осеменения коров, телок или овец. •В растворе натрия цитрата проводят оттаивание замороженной спермы быка в гранулах объемом 0,2—0,3 мл. При фракционном способе осеменения свиней в качестве заполнителя после дозы разбавленной спермы хряка вводят в матку соответствующий объем раствора натрия хлорида.

Натрия гидрокарбонат — неустойчивое соединение, поэтому для раствора дистиллированную воду кипятят, охлаждают до 40 °С и только потом добавляют химически чистую соль из расчета 10 г на 1000 мл. Приготавливают его ежедневно (при температуре 60 °С и выш5е натрия гидрокарбонат разлагается).

192.

Rp.: Solutionis Glucosi 7 % — 100 ml

Sterilisetur!

D.S. К капле спермы жеребца на предметном стекле добавить каплю раствора.

226

Он изоточен для спермиев жеребца. Им промывают 3—4 раза шприцы и канал резинового катетера при искусственном осеменении кобыл после дезинфекции их 70 %-ным спиртом.

При определении процента живых и мертвых спермиев используют 5 %-ный раствор водорастворимого эозина. Активность окислительновосстановительных ферментов, в частности дегидрогеназы, в сперме быка, барана и самцов птицы контролируют 0,01 %-ным раствором метиленового синего, приготовленного на 0,9 %-ном растворе хлорида натрия. 196.

Rp.: Methyleni coerulei 0,01

качества спермы быка, барана, гусака, индюка, петуха и селезня на время обесцвечивания (редукции) метиленового синего.

Для приготовления раствора метиленового синего используют принцип разбавления. Для маточного раствора берут 0,5 мл метиленового синего (желательно взвесить на аналитических весах) и вносят в 200 мл 0,9 %-ного раствора хлорида натрия. Раствор в течение трех дней сохраняют в стеклянной посуде с притертой пробкой, периодически встряхипают до полного растворения кристалликов метиленового синего. Из ма- i очного раствора пипеткой набирают 10 мл и добавляют к 90 мл 0,9 %-ного раствора натрия хлорида. Потом из полученного раствора необходи-

мо взять 40 мл и смешать с 60 мл 0,9 %-ного натрия хлорида. Таким образом можно получить 0,01 %-ный раствор метиленового синего, приготовленного на 0,9 %-ном растворе натрия хлорида.

СИНТЕТИЧЕСКИЕ СРЕДЫ ДЛЯ РАЗБАВЛЕНИЯ СПЕРМЫ

Сперму разбавляют, чтобы продлить выживаемость спермиев вне организма и увеличить объем эякулята. А в итоге повышается процент оплодотворяемости самок. При разбавлении спермы возможно дробление эякулята на несколько самок. При искусственном осеменении животных с маточным типом естественного осеменения (свинья—хряк, кобыла — жеребец) в связи с необходимостью введения в матку самок больших доз спермы с оптимальным количеством спермиев соблюдается принцип постоянства объемов эякулята, а при осеменении животных с влагалищным типом естественного осеменения (корова — бык, овца — баран), у которых объем спермы не играет положительной роли в продвижении половых клеток, придерживаются принципа постоянства числа спермиев в дозе нужных для оплодотворения яйцеклетки. Из-за непостоянства химического состава спермы при относительно стандартном приготовлении разбавителя по рецепту возможно несоответствие по осмотическому напряжению разбавляемой спермы и синтетической среды. Следует постепенно, как бы подслаивая, добавлять свежеприготовленный разбавитель в сперму. При таких условиях спермин лучше адаптируются к новым физико-химическим свойствам среды.

Синтетические среды готовят с применением сухих заготовок или компонентов в день разбавления спермы, строго соблюдая условия стерильности. Используют их в течение 3—4 ч с момента приготовления. Сухие заготовки ГЦЖ, лактозы, ЛФРМГЖ, ГХЦС выпускаются медицинской промышленностью. Компоненты, входящие в состав среды, взвешивают на аналитических или технических весах.

Посуду, необходимую для приготовления разбавителя, предварительно обеззараживают. Тампоном, смоченным 96 %-ным спиртом, протирают правую чашу весов. В колбу наливают необходимый объем дистиллированной воды и добавляют по рецепту все компоненты, за исключением санирующих препаратов, глицерина и желтка куриных яиц.

Приготовленный раствор стерилизуют в водяной бане 5—10 мин с момента закипания воды, затем охлаждают до 35—40 °С и только потом вносят спермосан-3, глицерин, желток. Перед этим куриные яйца моют, высушивают, протирают спиртовым тампоном (96 %) и раскалывают пополам стерильным скальпелем. Из одной половины скорлупы желток переносят в другую, отделяя белок в отдельную чашку. Потом желток осторожно помещают на стерильный лист фильтровальной бумаги. Покатыванием желтка на листе бумаги полностью удаляют белок с оболочки желтка. Затем вскрывают оболочку желтка и его сли-

228

перемешивают стерильной стеклянной палочкой. Добавляют антибиотики и сульфаниламидные препараты.

Перед разбавлением спермы обязательно проводят биологический контроль — на предметное стекло наносят каплю спермы и рядом — каплю разбавителя. Покрывают покровным стеклом 18X18 мм и обе капли соединяют. Если подвижность спермиев не снижается, синтетическая среда приготовлена правильно. Среду подогревают до температуры спермы (30—35 °С).

Синтетические среды разработаны с учетом физико-химических свойств спермы разных видов животных, а также в зависимости от способов ее хранения: а) кратковременно — при температуре 2—5 °С (охлажденная)' и при варьирующих (комнатных) температурах (6—22 °С); б) длительно — замораживание до —79 °С («сухой лед», углекислый газ) или до —196 °С (жидкий азот).

Разбавители для кратковременного хранения спермы. При темпера-

D.S Для разбавления спермы быка. Внести 10 мл желтка свежих куриных яиц.

Сперму быка с активностью не ниже 8 баллов и с концентрацией не менее 0,7 млрд/мл разбавляют в 20—50 раз. Хранят разбавленную сперму при температуре 2—5 °С в течение 72 ч (не более 3 сут) с активностью спермиев не ниже 7 баллов. В дозе разбавленной спермы 1,0 мл при осеменении должно содержаться 50—60 млн. спермиев с прямоли- нейно-поступательным движением (ППД).

199.

Rp.: Glucosi 8,0

Natrii citratis 28,0

Aquae destillatae 1000 ml Mi. solutio

D.S. Среда (ГЦЖ) для разбавления спермы барана. Добавить 200 мл желтка куриных яиц и спермосан-3 500— 750 тыс. ЕД.

Сперма барана с активностью не ниже 8 баллов и с концентрацией спермиев не менее 1 млрд/мл разбавляется синтетическими средами и 2—4 раза, хранится при температуре 2—5 °С в течение 24 ч. Исполь-

229

зуется разбавленная среда барана с подвижностью спермиев не ниже 8 баллов в дозе 0,15—0,3 мл. В данной дозе разбавленной спермы при осеменении должно содержаться 80—100 млн. спермиев с прямолиней- но-поступательным движением.

Сперма жеребца с активностью не ниже 6 баллов и с концентрацией спермиев не менее 150 млн мл разбавляется средами в 2—4 раза и хранится при температуре 2—5 °С в течение 48 ч. При осеменении кобыл разбавленная сперма жеребца используется с активностью спермиев не ниже 5 баллов в дозе 20—40 мл с содержанием 400 млн. клеток с прямо- линейно-поступательным движением (табл. 6).

6.Состав других синтетических сред для разбавления спермы быка, барана, буйлова, жеребца и хранения ее при 2—5 °С

В гликогол-цитратный раствор для спермы быка добавляют еще желток куриных яиц в объеме 120—200 мл и санирующие препараты. В среду для разбавления спермы барана добавляют 150 мл желтка куриных яиц и санирующие средства: бензилпенициллин натрия или калия, стрептомицин сернокислый или солянокислый поровну в дозе 3000 ЕД и стрептоцид. В синтетическую среду для спермы буйволов вносят 43 мл желтка свежих куриных яиц, разбавляют 1:4—1:15 и хранят разбавленную сперму при 2—5 °С в течение 3 сут. К раствору глюкозы для разбавления спермы жеребца приливают 8 мл, а в лактозо-хелато-цитрат- ную среду—16 мл желтка куриных яиц и добавляют спермосан-3 25—30 тыс. ЕД.

Синтетические среды для разбавления спермы птицы (петуха, индюка, гусака и селезня). Разбавители предохраняют спермин от температурного повреждения, удлиняют сроки хранения спермы, предупреж-

230

дают через них распространение инфекционных болезней, этим самым повышают оплодотворяемость яиц и увеличивают число возможных осеменений. Свежеполученную и разбавленную сперму нужно использовать в течение 30 мин. Заготовку расфасованного стерильного разбавителя хранят в сухом виде в полиэтиленовых пакетах при температуре не выше -j-4 °C (не более 2 мес). Сперму разбавляют в соотношении 1:1 или 1:2 и, если необходимо, то хранят иногда при температуре 2—4 °С

Свежеполученную сперму селезня разбавляют в 2—4 раза и используют ее в течение 10—20 мин (табл. 7).

7.Другие синтетические среды для разбавления спермы самцов сельскохозяйственной птицы и хранения ее при 2—4 °С

231

На осеменение кур используют сперму густую (более 3 млрд/мл спермиев) и среднюю (2—3 млрд/мл) с активностью не ниже 7 баллов, однократная ее доза 0,028—0,03 мл с количеством спермиев не менее 100—150 млн. Индеек осеменяют густой (3 млрд/мл и более) и средней (2—3 млрд/мл) спермой с активностью 7 баллов, однократная доза 0,025—0,03 мл, в ней должно содержаться не менее 80—100 млн. спермиев. Гусынь осеменяют густой (более 0,9 млрд/мл) и средней (0,5 млрд/мл) спермой с активностью не ниже 7 баллов, доза разбавленной спермы 0,1 —0,2 мл с содержанием 20—50 млн. активных спермиев. Доза разбавленной спермы селезня при осеменении уток 0,1 мл имеет не менее 40—60 млн. спермиев с прямолинейно-поступательным движением, активность их не ниже 7 баллов. Осеменяют кур, индеек, гусынь и уток через 5—6 дней однократно во второй половине дня.

Синтетические среды, применяемые для разбавления спермы быка,

барана и хряка с целью хранения ее при варьирующих температурах

Среду подогревают на водяной бане до 35 °С, а затем разбавляют сперму быка из расчета, чтобы в 1 мл разбавленной спермы содержалось 40—50 млн. активных спермиев. Степень разбавления 1:10—1:30.

208.

232