Занятие № 2
ТЕМА. СТРУКТУРНАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ БЕЛКОВЫХ
МОЛЕКУЛ. МЕТОДЫ ОЧИСТКИ БЕЛКОВ
Цель занятия: 1.Изучить структурную организацию белковой
молекулы как основу функционирования всех белков.
2.Ознакомиться с особенностями структуры фибриллярных
белков.
3.Освоить методы очистки белков от примесей на примере
диализа.
Исходный уровень знаний:
- аминокислоты: строение, классификация;
- ковалентные и нековалентные связи: характеристика, при-
меры;
- физико-химические свойства белков.
Содержание занятия.
I.2. Строение глобулярных белков (первичная, вторичная, третичная, четвертичная структуры).
Особенности строения молекулы фибриллярных белков.
Взаимосвязь структуры и функции белков.
Видовая специфичность первичной структуры и антигенные свойства белков.
Методы очистки белков (хроматография, электрофорез, диализ и др.).
Гидролиз белка (виды, условия, продукты полного и неполного гидролиза).
II.1. Работа: диализ белка
Принцип метода.
Диализ основан на способности полупроницаемых мембран пропускать сквозь поры низкомолекулярные вещества и задерживать высокомолекулярные коллоидные частицы. Ди-ализ является удобным методом очистки белков. При диализе коллоидный раствор помещают в коллодиевый или целлофановый мешочек и погружают в дистиллированную или водопроводную воду. Молекулы солей, сахаров и других низкомолекулярных веществ легко диффундируют через мембраны, а вещества коллоидной природы остаются в мешочке.
1
А)
Б)
3
2
Рис. 1. Варианты устройства системы для диализа белка.А) диализатор из стеклянного цилиндра с дном из полупроницаемой мембраны. Б) диализатор из коллодиевого мешочка. 1-держатель, 2-диализуемый раствор, 3-диализат.
Порядок выполнения работы.
В коллодиевый мешочек (диализатор) налить 5 мл солевого раствора белка. Погрузить в стакан с дистиллированной водой на 1 час. Через час с небольшими порциями диализата (наружная жидкость) проделать реакции на хлориды и белок и убедиться в том, что минеральные соли продиффундировали во внешний сосуд, а белок остался в содержимом мешочка.
Проба на белок (биуретовая реакция).
|
Реактивы (кап.) |
1 пробирка (диализуемый раствор) |
2 пробирка (диализат) |
|
Исследуемая жидкость |
5 |
5 |
|
10% раствор NaOH |
5 |
5 |
|
1% раствор CuSO4 |
1 |
1 |
|
РЕЗУЛЬТАТЫ:
|
|
|
|
Проба на хлориды | ||
|
Исследуемая жидкость |
10 |
10 |
|
10% раствор HNO3 |
1 |
1 |
|
1% раствор AgNO3 |
1 |
1 |
|
РЕЗУЛЬТАТЫ:
|
|
|
ВЫВОД:
III.2. Контрольные вопросы.
Что такое диализ?
Что такое диализат и диализуемая жидкость?
Какие реакции используются для контроля диализа?
Как используется диализ в медицине?
Материал для самоподготовки. I а)1. с.26-32, 49-71; II; III.