II.1. Работа № 1. Качественная реакция

НА ВИТАМИН В₂

Рибофлавин входит в состав простетической группы флавиновых ферментов - флавопротеидов в виде коферментов флавинадениндинуклеотида (ФАД) и флавинмононуклеотида (ФМН). Флавопротеиды участвуют в реакции дегидрирования, т.е. отщепления электронов и протонов от субстрата. Они участвуют в окислении НАД*Н (Н⁺) в цепи биологического окисления -аминокислот, -кетокислот и других субстратов.

Принцип метода и химизм реакции.

Окисленная форма витамина В₂ представляет собой желтое флюоресцирующее в ультрафиолетовых лучах вещество. Реакция на витамин В₂ основана на его способности легко восстанавливаться. При этом раствор витамина В₂, обладающий желтой окраской, приобретает сначала розовый цвет за счет образования промежуточных соединений, а затем обесцвечивается, т.к. восстановленная форма витамина В₂ бесцветна.

CH₂-(CHOH)₃-CH₂OH CH₂-(CHOH)₃-CH₂OH

| |

N N N NH

H₃C- ═O H₃C- ═O

+Zn+2HCl

Н₃С- NH H₃C- NH

N ║ NH ║

O O

Рибофлавин (В₂) Рибофлавин (В₂)

окисленный восстановленный

(желтый) (бесцветный)

Порядок выполнения работы:

К 10 каплям раствора витамина В₂ добавить 5 капель концентрированной хлористо-водородной кислоты и опустить зёрнышко металлического цинка.

Результат:

Работа № 2. КАЧЕСТВЕННАЯ РЕАКЦИЯ

НА ВИТАМИН РР

Витамин РР входит в состав коферментов пиридинзависимых ферментов: никотинамидадениндинуклеотида - НАД⁺ и никотинамидадениндинуклеотидфосфата - НАДФ⁺. Эти коферменты входят в состав дегидрогеназ и участвуют во многих окислительно-восстановительных реакциях. Отсутствие витамина РР в пище вызывает пеллагру.

Принцип метода.

Витамин РР при нагревании с раствором ацетата меди

образует синий плохо растворимый осадок медной соли никотиновой кислоты.

Порядок выполнения работы:

Перед определением 3% раствор витамина РР следует обязательно взболтать. Затем набрать 20 капель его и нагреть до кипения; при этом мутный раствор становится прозрачным. Прилить, предварительно взболтав, 20 капель 5% раствора ацетата меди к нагретому раствору витамина РР. Затем содержимое пробирки довести до кипения и сразу охладить под струёй холодной воды.

РЕЗУЛЬТАТ:

Работа № 3. КАЧЕСТВЕННАЯ РЕАКЦИЯ НА ВИТАМИН С

Аскорбиновая кислота связана с системой глутатиона и участвует в тканевых окислительно-восстановительных процессах. Она необходима для гидроксилирования стероидных гормонов, образования гидрофолиевой кислоты, активации дофамингидроксилазы.

Принцип метода.

Аскорбиновая кислота способна легко окисляться и восстанавливать различные вещества (железосинеродистый калий, метиленовую синь, молекулярный йод, 2,6 - дихлорфенолиндофенол и др.).

1. O OH

|

O=C-CHO=COH-CH-CH-CH₂OH+2K₃Fe(CN)₆+2KOH

O OH

|

---->O=C-CO-CO-CH-CH-CH₂OH+2K₄Fe(CN)₆+2H₂О

2. 3K₄Fe(CN)₆+4FeCl₃ Fe₄[Fe(CN)₆]₃+12KCl

берлинская лазурь (синего цвета)

Порядок выполнения работы:

К 5 каплям 1% раствора витамина С прилить 1 каплю 10% раствора едкого натра и 1 каплю 5% раствора железосинеродистого калия, перемешать, добавить 3 капли 10% раствора соляной кислоты и 1 каплю 1% раствора хлорного железа.

РЕЗУЛЬТАТ:

III.2. Контрольные вопросы.

В состав каких коферментов входит витамин В₂?

Как выявить окисленную и восстановленную формы рибофлавина?

В каких реакциях участвует аскорбиновая кислота?

На чем основан принцип выявления аскорбиновой кислоты?

В состав каких коферментов входит витамин РР?

Какое заболевание развивается при отсутствии в пище витамина РР?

Материал для самоподготовки: I а)1. с.204-247; II; III.