Работа 1: определение групп крови.

ЦЕЛЬ: Научиться определять группу исследуемой крови

по системе АВ0

Методика выполнения работы. Для выполнения работы необходимо иметь стандартные сыворотки 4-х групп крови 2-х серий, маркированные тарелки, предметные стекла, спирт, ватные тампоны, скарификаторы,0,9 % раствор хлорида натрия. Группы крови определяют по антигенным свойствам эритроцитов, которые устанавливаются с помощью стандартных сывороток, содержащих известные агглютинины. Для определения групповой принадлежности крови по системе АВО пользуются стандартными сыворотками 4-х групп крови 2-х серий. Работу рекомендуется проводить в хорошо освещенном помещении при температуре от +15 до +25. Кровь для определения групп крови берут, как правило, из пальца. Допускается брать ее из мочки уха или же с помощью шприца из вены. Количество исследуемой крови (эритроцитов) должно быть приблизительно в 10 раз меньше количества сыворотки, с которой ее смешивают.

Последовательность выполнения работы. На маркированную тарелку наносят в соответствующий сектор по 1-2 капли стандартной гемагглютинирующей сыворотки 1,2,3,4 групп. Сыворотки из каждого флакона следует брать отдельной пипеткой. Обработать палец спиртом, проколоть скарификатором. Первую каплю снять ватным тампоном, а затем уголком предметного стекла взять немного крови, внести в каплю сыворотки 1 группы и хорошо перемешать. Другим уголком стекла внести кровь в каплю сыворотки 2 группы и т.д. Слегка покачивая тарелку, следить за агглютинацией эритроцитов. Через 3 мин после наступления агглютинации следует добавить по 1 капле 0,9 % раствора хлорида натрия для исключения неспецифической агглютинации. Окончательный результат читают через 5 минут.

Рекомендации к оформлению работы. Определите, к какой группе крови принадлежит исследуемая кровь. Напишите состав ее агглютиногенов и агглютининов. Нарисуйте картину, образующуюся при взаимодействии сыворотки и крови для каждой группы. Объясните причину появления или отсутствия агглютинации.

Работа 2. Определение резус-фактора экспресс-методом в пробирках без подогрева.

ЦЕЛЬ: Научиться определять Резус-принадлежность исследуемой крови.

Методика. Для работы необходимо иметь специально приготовленный универсальный реагент-антирезус, пипетки Пастера, пробирки объемом не менее 10 мл. 0,9% раствор хлорида натрия, скарификаторы, ватные тампоны, спирт. Кровь для исследования следует брать в количестве 1-2 мл в сухую пробирку без стабилизатора. На пробирке написать фамилию и инициалы лица, у которого взята кровь. Обычно после свертывания крови на дне пробирки остается небольшое количество свободных эритроцитов, которые следует употреблять для исследования. Если этих эритроцитов недостаточно, следует встряхнуть сверток для большого количества эритроцитов. Может быть использована свежая несвернувшаяся кровь, взятая из пальца непосредственно перед исследованием.

Последовательность выполнения работы. На дно пробирки внесите 1 каплю антирезусной сыворотки и 1 каплю исследуемой крови. Пробирку встряхнуть и несколько раз перевернуть так, чтобы содержимое ее растеклось по стенкам. Это значительно ускоряет агглютинацию и делает ее крупно-лепестковой. Агглютинация на стенках пробирки наступает как правило, в течении первой минуты, но для образования устойчивого комплекса «антиген – антитело» и четко выраженной агглютинации, а также в случае замедленной реакции при слабо выраженном резус-антигене наблюдение следует проводить не менее 3 мин. Для исключения неспецифической агглютинации эритроцитов в пробирку добавить 2-3 мл 0,9% раствора хлорида натрия и перемешать путем 1-2 кратного перевертывания пробирки. Не взбалтывать. Оценку результатов проводить визуально по наличию или отсутствию агглютинации эритроцитов. При положительном результате агглютинаты легко различимы в виде красных зерен или хлопьев на прозрачном, почти бесцветном фоне жидкости. При отрицательном результате в пробирке видна равномерно окрашенная в розовый цвет слегка опалесцирующая жидкость.

Рекомендации к оформлению протокола работы: По полученным результатам определите резус-принадлежность исследованной крови, опишите причину появления или отсутствия агглютинации. Нарисуйте пробирки с резус- отрицательной и резус-положительной кровью.