Лабораторная работа № 3 Специфические свойства ферментов
Опыт 1. Специфичность ферментов. Одно из наиболее характерных свойств ферментов – их высокая специфичность, заключающаяся в том, что каждый фермент может катализировать только одну или группу сходных реакций, действуя на одно вещество или на ряд близкородственных веществ. Так, амилаза слюны ускоряет гидролиз только полисахаридов и не оказывает действие на дисахариды.
Порядок выполнения работы.
В две пробирки приливают по 1 мл разведенной слюны. В первую пробирку добавляют 10 капель 1% раствора крахмала, во вторую –10 капель 1% раствора сахарозы. Обе пробирки помещают на 10 минут в водяную баню при температуре 38°С, после чего с содержимым пробирки проделывают реакцию Троммера на углеводы.
Результаты опыта заносят в таблицу.
|
№ п/п |
Субстрат |
Фермент |
Температура |
Реакция Троммера |
Выводы |
Опыт 2.Реакция Троммера.
К 5 каплям исследуемой жидкости прибавляют 5 капель 10% раствора NaOH и 5 капель раствора CuSO4 и нагревают. В присутствии глюкозы и мальтозы выпадает желтый осадок гидрата закиси меди или красный осадок закиси меди.
Полученный результат занести в таблицу.
|
№ п/п |
Субстрат |
Фермент |
Температура |
Реакция на крахмал с йодом |
Реакция Троммера |
Выводы |
|
1. |
|
|
|
|
|
|
|
2. |
|
|
|
|
|
|
Опыт 2. Влияние температуры на активность ферментов.
Ферменты очень чувствительны к температуре и при нагревании до 60-80оС они теряют активность. В термолабильности ферментов можно убедиться на примере действия фермента слюны – амилазы, которая при кипячении теряет свои ферментативные свойства.
Порядок выполнения работы.
В две пробирки вносят по 1 мл разведенной слюны. Содержимое одной из пробирок кипятят на спиртовке в течение 1-2 мин и затем охлаждают в стакане с водой. В обе пробирки добавляют по 10 капель 1% раствора крахмала, встряхивают и оставляют на 10 мин при комнатной температуре. После этого проделывают качественную реакцию на крахмал, добавляя в каждую пробирку по 2 капли настойки йода. Йод с крахмалом дает синее окрашивание.
Полученные результаты заносят в таблицу.
|
№ п/п |
Субстрат |
Фермент |
Температура |
Реакция на крахмал с йодом |
Выводы |
Опыт 3. Влияние активаторов и парализаторов на активность амилазы слюны.
Активаторами и парализаторами называются вещества, которые способны ускорять или тормозить действие ферментов. Активность амилазы слюны повышается в присутствии хлористого натрия – специфичного активатора амилазы. Сернокислая медь оказывает тормозящее действие на активность амилазы.
Если добавить в пробирки, содержащие смесь слюны и крахмала, в одну – хлористый натрий, в другую – сернокислую медь и в третью – воду ( контрольная проба ), то за один и тот же промежуток времени в первой пробирке произойдет полное расщепление крахмала, во второй – обнаружится нерасщепленный крахмал, в третьей – произойдет частичное расщепление крахмала с образованием декстринов.
Порядок выполнения работы.
В три пробирки наливают по 1 мл разведенной слюны и по 0,5 мл 1% раствора крахмала. Содержимое пробирок перемешивают. В первую пробирку добавляют 0,5 мл 1% раствора NaCl, во вторую 0,5 мл 1% раствора CuSO4 и в третью – 0,5 мл дистиллированной воды. Содержимое пробирок перемешивают и оставляют на 5 минут при комнатной температуре. По истечении указанного времени во все пробирки добавляют по 2 капли настойки йода. Полученные результаты заносят в таблицу.
|
№ п/п |
Субстрат |
Фермент |
Добавленное вещество |
Окрашивание (реакция с йодом) |
Выводы |
Опыт 4.Определение активности амилазы слюны.
Порядок выполнения работы.
Перед началом работы готовят раствор амилазы. Для этого смешивают 1 мл 1%-го раствора крахмала и 0,5 мл слюны, разбавленной в 10 раз. Через каждые 2 минуты отбирают на предметное стекло по 1 капле этой смеси и добавляют к ней 1 каплю раствора Люголя. Крахмал должен полностью расщепиться за 10 минут (желтая окраска пробы с йодом). Если расщепление крахмала происходит быстрее, слюну надо развести еще в 2-4 раза; если медленнее – уменьшить начальное разведение.
Контрольные вопросы.
1. Назовите принципы номенклатуры и классификации ферментов. Приведите примеры.
2. В чем состоит специфичность действия ферментов? Приведите примеры.
3. Какие ферменты осуществляют процесс активирования аминокислоты? Приведите примеры реакций, в которых участвуют ферменты аминотрансферазы.
4. Какие процессы в организме катализируют ферменты гидролазы? Приведите примеры.
5. Каково строение ферментов? Дайте понятие о простетической группе и активном центре ферментов. Приведите примеры.
6. Что такое коферменты? Какие витамины входят в состав коферментных групп НАД, НАДФ, ФАД? Какую роль НАД, НАДФ и ФАД играют в окислительных процессах, протекающих в организме?
Самостоятельная работа.
Используя материал лекции и учебника письменно ответить на вопросы:
1.Какая связь существует между витаминами и ферментами?
2.Что такое апофермент и кофермент?
3.По какому принципу и на какие классы делятся ферменты?