41.Риф (мфа) и его использование в вирусологии.

1.Прямой (одноступенчатый метод).Суть: связывание а/г со специфич. флюоресц. а/т и образование комплекса, дающего свечение под флюоресц. микроскопом.Компоненты: вивуссодерж. материал; специфич. флюоресц. сываоротка или глобулин.Схема: на предм. стекло мазок; фиксация хим. методами; 2-3 кпли специф. флюоресц. сыворотки; в термостат, влажн. камеру, t=37, 40-60 мин; 2-3 раза промыть дест. водой; микроскопия. Учет:под люминисц. микроскопом в крестах. 2.Непрямой (двухступенчат.) метод, А)с флюоресцир. антивидовой сывороткой или антиглобулином. Суть: та же. Компоненты: вируссод. материал; специф. нефлюоресц. сыворотка; флюоресц. антивидовая сыворотка или антиглобулин. Схема: мазок; фиксация хим. методами; 2-3 капли специф. нефлюоресц. сыворотки; термостат, теже условия;2-3 раза промыть дист. водой; высушить; 2-3 капли антивид. флюоресц. сыворотки; термостат, теже условия; промыть; микроскопия. Учет: под люминисц. микроскопом в крестах. Б) с флюоресц. окраской комплемента.Суть: та же. Компоненты: вируссод. материал; специф. флюоресц. сываротка; комплемент; флюоресц. антикомплементарная сыворотка. Схема: мазок; фиксация; 2-3 капли смеси сыворотка+комплемент; термостат, те же условия; отмывают; высушивают; 2-3 капли флюоресц. антикомплементарной сыворотки; термостат; промывают; микроскопия. Учет: под люминисц. микроскопом в крестах.

42.Биологические методы исследования в вирусологии.

1. Восприимчивые животные. Цель использования: индикация вируса; получение диагностикумов и специф. гипериммунных сывороток; поддрежание вируса; достоинства – очень точно; недостатки: дорого. Требования для модели: животные должны быть чувствительны к этому вирусу, здоровы и серонегативны к нему (в сыворотке нет а/т к этому а/г); только из благополучн. хозяйств; подбор по методу аналогов (один вид, масса, пол, возраст, упитанность, рацион и условия содержания). Методы заражения: зависят от ворот инфекции и тропизма; жиаотных метят и содержат в одинак. условиях в виварии для зараженных животных, наблюдают( по времени – 2-3 инкубац. периода) до гибели или убивают. Индикация: по признакам – клин. признаки, гибель(вскрытие), пат.анатомич. исследования, серодиагностика (сразу идентификация). 2. К/Э. Цель: индикация вируса; накопление и поддержание вируса при производстве биопрепаратов; титрование вируса; постановка РН. Требования: должны быть чувствительны к данному вирусу, получены из благоприятного хозяйства от здоровой, серонегативной птицы; скорлупа чистая, без трещин, наплывов.ю насечек; подбор по методу аналогов. Методы заражения: (шпора №43); не учит-т погибш. в теч. 24 ч эмбрионы –травматизм, если не выявлено никаких признаков -2-3 слепых пассажа. Индикация: 1)макроскопич. метод (зародыш –гибель,недоразвитость, перекруч. шея, сам эмбрион, кровоизлияния, измененияво внутр. органах; ХАО – оспины, кровоизлияния, запустение или переполнение сосудов; Жидкости – увелич. или уменьш. объем, измен. цвет, консистенция, примеси); 2)микроскопич. метод – световая микроскопия – тельца-включения, ЦПД, симпласты; 3) по гемагглютинир. дей-е вируса – капельная РГА. 3. К/К. Цель: индикация вируса. Требования: получены из тканей восприимч, к данному вирусу животных, учитывать тропизм; клетки и сои без повреждений и признаков дегенерации. Методы заражения: 1)контактный; 2)диффузный. Индикация: ЦПД; РГАд; образование бляшек; цветная проба; обнаружение телец-включений, интерференция, электрон.. микроскопия, РИФ.