Исследование возможных сдвигов микробио­логических показателей

Для апробации изучаемых паст создаются группы обследуемых людей в количестве не менее 10 че­ловек в каждой группе: 1 -я — контрольная — чистка зубов плацебо-пастой, 2-я — чистка зубов изучае­мой пастой, 3-я — использование известной анало­гичной или сходной по основным свойствам пасты. Чистка зубов проводится 2 раза в день. Пробы микрофлоры полости рта забирают трое­кратно: до чистки зубов испытуемым средством, непосредственно после чистки зубов и спустя 2,5-3 часа после чистки зубов. Данный срок обусловлен способностью микрофлоры полости рта к восста­новлению фоновых показателей. Обследуемый прополаскивает полость рта в тече­ние 1-1,5 минут (10 движений) 8 мл стерильного физиологического раствора. Всю полоскательную жидкость собирают в пробирку, гомогенизируют 15 минут с помощью встряхивателя или вибрато­ра для биологических жидкостей. Полоскательную жидкость в количестве 0,5 мл последовательно раз­водят (10^-1, 10^-2, 10^-3 ...10^-8) физиологическим рас­твором.

Из каждого разведения высевают по 0,5 мл в жид­кие питательные среды (0,2% сахарный бульон и бульон для лактобактерий, тиогликолевый бульон для выделения Streptococcus mutans). Посевы для определения титра аэробной кокковой флоры (0,2% сахарный бульон) инкубируют 24 часа при 37°С в термостате, для определения количества лактобактерий — 48 часов, Streptococcus mutans — 72 часа при 37°С в анаэростате. После 24-часовой инкубации из каждой пробирки с сахарным буль­оном, начиная с максимального разведения, где на­блюдается бактериальный рост, делают посевы на агаризованные среды агар с кровью, желточно-солевой агар (по Чистовичу), агар с бромтимоловым синим. После 48-часовой инкубации в анаэростате посевов на жидкой среде, толерантной для лак­тобактерий, делают посевы бактериологической петлей на твердую среду для лактобактерий, спус­тя 72 часа после инкубации посевов на тиоглико-левой среде делают высевы на селективный агар Streptococcus mutans.

Предварительный учет результатов возможен через 24 часа, окончательный — через 48 часов инкуба­ции соответственно в аэробных и анаэробных усло­виях. Идентификацию микроорганизмов проводят по культурным признакам и микроскопии мазков-препаратов.

Окончательная оценка влияния зубных паст на микро­организмы полости рта проводится по сравнитель­ным показателям аутофлоры полости рта груп­пы обследуемых через 2 недели и через 1 месяц при систематическом использовании изучаемых средств.

Следует учитывать, что количественные сдвиги лак­тобактерий и стрептококков α- и γ-типов не должны превышать одно разведение от исходного, т.е. пас­та должна обладать слабым бактериостатическим действием на микрофлору полости рта. К окончанию апробации в полости рта не должны обнаруживаться микроорганизмы, указывающие на дисбактериальные сдвиги, такие как кишечная палочка, протей, синегнойная палочка и патоген­ные виды стафилококка при условии отсутствия их у данного человека до начала эксперимента. Зна­чительное уменьшение высеваемости штаммов мутантного стрептококка и патогенных микроорганиз­мов из полости рта при сохранении представителей физиологической флоры полости рта (аэробные стрептококки, лактобактерий) является хорошим показателем при оценке зубной пасты.

Изучение возможного аллергизирующего и местно-раздражающего действия. Учитывая высокую всасываемость отдельных эле­ментов композиции зубной пасты через слизистую оболочку полости рта, в отдельных случаях возмож­но появление общерезорбтивного действия. Даже при наличии в составе пасты известных компонен­тов следует учитывать возможность повышенной чувствительности у каждого конкретного человека и вероятность воздействия компонентов, которые могут привести к нежелательным последствиям. Отсюда необходимо контролировать изменения в общем самочувствии лиц и появлении аллерги­ческих реакций.

Наличие местно-раздражающих средств можно определить по субъективной оценке наблюдаемых, а также на основе клинических наблюдений. Стойкая гиперемия слизистой оболочки полости рта, чувство жжения, появление болезненности десен являются клиническими признаками местно-раздражающего действия изучаемой пасты, которая при нанесении на зубы неизбежно попадает на слизистую оболоч­ку полости рта. При случайном попадании исполь­зуемой зубной пасты в желудок (при заглатывании со слюной малых доз) возможно появление призна­ков раздражающего действия со стороны желудоч­но-кишечного тракта (тошнота, боли и др.).

Обработка и оформление полученных результа­тов, составление отчета проводится на основании материалов испытаний новой профилактической или лечебной зубной пасты путем обобщения ре­зультатов исследования и составления заключения о ее профилактической или лечебной эффективнос­ти в виде протокола. В протоколе проводится анализ полученных результатов от опытной и контрольной групп. Этот анализ помогает дать сравнительную характеристику новой зубной пасты и пасты срав­нения для выявления преимуществ одной из них. В протоколе фиксируются противопоказания для назначения лечебной зубной пасты и даются реко­мендации для ее амбулаторного применения.

При составлении протокола о результатах испыта­ний новой зубной пасты необходимо отметить:

1. Где и когда проводилось клиническое испытание, официальное название клинического учреждения.

2. Название зубной пасты (наименование фирмы и страны).

3. Качественный и количественный состав ингредиен­тов, составляющих зубную пасту.

4. Подробные сведения о контрольной и опытной группах больных и здоровых лиц (пол, возраст, диагноз и т.п.).

5. Данные по клиническим и параклиническим крите­риям терапевтической и профилактической актив­ности новой зубной пасты в сравнении с известны­ми пастами с приложением графиков, таблиц и т.п.

6. Данные о количестве зубной пасты, которое полу­чил каждый больной, частоте и средних сроках ее применения.

7. Анализ полученных результатов об эффективности пасты в сопоставлении с полом, возрастом, дав­ностью заболевания, наличием осложнений.

8. Сведения о побочных явлениях новой пасты, их ана­лиз, предполагаемые меры профилактики.

9. Обоснованное заключение о преимуществах испы­танной пасты или их отсутствии.

В отчете еще раз окончательно уточняются схемы применения профилактических и лечебных паст. Обосновывается целесообразность назначения ле­чебной или профилактической пасты в амбулатор­ной практике.

ИСПЫТАНИЯ НОВЫХ ПАСТ ЗУБНЫХ ЭКСПЕ­РИМЕНТАЛЬНО-ФАРМАКОЛОГИЧЕСКИЕ. Проводятся с целью выяснения специфического действия и его механизма в условиях эксперимента, предше­ствуют испытаниям новых паст зубных клиническим и позволяют оценить безопасность применения пасты в клинике. Регламентируются «Методичес­кими указаниями по экспериментальному (фарма­кологическому) и клиническому испытанию профи­лактических и лечебных зубных паст» (Утверждены Минздравом СССР в 1983 г.).

Для новых зубных паст с включением одного из­вестного действующего компонента необходимо иметь не только доказательства превышения спе­цифической активности, но и данные изучения ме­ханизма усиления эффекта. Например, выявление более значительного контакта новой пасты с по­верхностью зубов и тканей пародонта. Для новых зубных паст, состоящих из нескольких известных специфических компонентов (см. Компоненты пасты зубной, Компоненты пасты зубной антимикробные, Компоненты пасты зубной лечебно-профилактичес­кие, Компоненты пасты зубной пенообразующие, Компоненты пасты зубной полирующие, Компоненты пасты зубной связующие, Компоненты пасты зубной увлажняющие), гипотетически потенцирующих спе­цифическое действие, необходимо стремиться по­лучить экспериментальные доказательства эффек­тивности именно данной комбинации. При необходимости изучения механизма действия исследования могут проводиться in vivo или in vitro. Характер и объем исследований определяется спе­цификой предлагаемой зубной пасты. В случае изу­чения ее для целей сертификации, они ограничива­ются параметрами СанПиН 1.2.676-97. Изучение абразивных свойств зубных паст. Существует несколько методов испытания абразив­ности паст зубных:

1. Изучение in vitro абразивных свойств зубных гигие­нических средств весовым методом с определени­ем разницы веса зубов до и после чистки;

2. Изучение in vitro абразивных свойств зубных гиги­енических средств весовым методом с определе­нием разницы веса пробных образцов (пластинок медной фольги — БГС 12090-74, длиной — 120 мм, ширина — 12 мм) после чистки (с помощью специ­ального аппарата и пробные образцы — 6 пластинок в течение 10 000 циклов чистятся 1 г пасты 6 оди­наковыми зубными щетками с естественной или ис­кусственной щетиной, предварительно смоченными водой; сравнивается вес пластинок (взвешиваются на аналитических весах с точностью до 0,0002 г) до и после чистки, после смыва пасты; учитывается разница в массе пластинок, берется среднеариф­метическая величина из 6 определений; ошибка ме­тода— 10%);

3. Определение средней абразивности для ориенти­ровочной оценки абразивных свойств пасты (уста­навливается с помощью 10 исследований; не долж­на превышать 0,0045 г в пересчете на ежедневную чистку зубов в течение месяца; недостатк метода — ошибки при взвешивании испытуемых образцов вследствие неполного удаления влаги);