- •Ферменты-2
- ••Выдвинутая в 1913 году Л. Михаэлисом и
- •Структурно-функциональная организация ферментов. Схема
- •Структурно-функциональная организация ферментов.
- •• Активный центр включает в себя:
- ••1 этап: постепенное «причаливание» S к «якорной» площадке F.
- ••Химические связи, действующие при этом:
- ••Якорный участок трипсина представлен длинным узким карманом с отрицательно заряженный Асп в глубине
- ••В гидрофобном кармане, образованном радикалами Гли, Три и Лей, химотрипсина располагается боковая цепь
- ••В основе химических реакций лежит образование и разрыв химических связей
- •Биологически важными нуклеофилами являются –NH2, -OH, -SH, и имидазольные группы аминокислот. Нуклеофильные формы
- ••Электрофильные реагенты :
- ••По направлению реакций с учетом конечного результата можно выделить следующие типы реакций
- ••2. Реакции кислотно- основного взаимодействия
- ••Факторы, определяющие активность ферментов [E], [S], [P], Km.
- •• Существенное влияние на активность ферментов оказывает реакция среды. Для проявления их оптимального
- ••В некоторых случаях сдвиг pH на единицу снижает активность фермента на 80%. Поэтому
- •Оптимум рН
- •Фермент
- •Влияние температуры
- ••Так как все ферменты являются белками, а белки при температуре выше 40-500 С
- ••Активность фермента повышается при повышении температуры. Начиная с определенной температуры, совпадающей с началом
- •Специфичность ферментов
- ••Правда, лишь небольшая часть ферментов обладает абсолютной специфичностью, т.е. катализирует превращение только одного
- •Регуляция активности ферментов
- •Активная регуляция:
- ••Регуляция путем изменения количества фермента.
- ••Замена глюкозы на лактозу приводит к индуцированному синтезу фермента галактозидазы, расщепляющей лактозу на
- ••В животных тканях подобный быстрый синтез ферментов наблюдается реже, однако при поступлении в
- ••С другой стороны, иногда под действием этих гидроксилаз чужеродные вещества превращаются в более
- ••Регуляция активности по принципу обратной связи.
- •Аллостерическая регуляция.
- •Свойства аллостерических ферментов:
- •Существует 2 вида веществ (эффекторы), которые оказывают на фермент двоякое действие:
- ••При взаимодействии аллостерического фермента с аллостерическим активатором резко возрастает степень сродства фермента к
- ••Кинетика
- •Имеется реакция:
- •Основы термодинамики катализа
- •Энергия активации
- •Термодинамика ферментативных
- •Кинетика ферментативных
- •Кинетика ферментативных реакций. pH
- •Кинетика ферментативных реакций. Температура
- ••Активность фермента зависит от концентрации субстратов.
- ••Если концентрация субстрата [S] очень низкая, ограничивающим скорость реакции становится этап образования комплекса
- •• Если концентрация субстрата [S] высокая, количество образующегося комплекса ES зависит от количества
- ••Ограничивающим скорость реакции становится этап образования продукта (катализ). В реакции, катализируемой ферментом имеется
- •Кинетика ферментативных реакций. Концентрация субстрата
- ••Важным для правильной оценки результатов исследования зависимости скорости реакции от концентрации является измерение
- ••При взаимодействии фермента и субстрата очень быстро наступает равновесие между скоростью образования и
- ••В реакции, катализируемой ферментом можно выделить четыре реакции, каждая из которых характеризуется собственной
- ••Важной качественной характеристикой фермента является константа Михаэлиса
- ••тогда, количество свободного фермента: [Et] - [ES]
- ••[этап 2] гипотеза: Образование
- ••Уравнение Михаэлиса и Ментен графически – прямоугольная гипербола
- ••Каково физическое значение Km? Уравнение Михаэлиса-Ментен можно преобразовать к такому виду
- ••Из этого уравнения легко показать, что
- ••Наиболее удобное сочетание эффективности и контроля соблюдается при условии, если концентрация субстрата одного
- ••Знание Км позволит Вам оценивать концентрацию субстрата, необходимую для гарантии насыщения. Эта концентрация
- ••В физиологических условиях, для эффективной работы, концентрация субстрата должна быть на уровне Км
- ••Практически рассчитать значения Км и Vmax, пользуясь кривой, описываемой уравнением Михаэлис и Ментен
- •• Такой способ выражения позволяет более точно рассчитать значения Км и V. Пересечение
- •Примеры использования данных кинетических исследований ферментов в медицине
- ••Альдегиддегидрогеназа обычно существует в двух формах, с высоким сродством (низкие значения Км) к
- ••Семейная пара с генетической предрасположенностью к болезни Неймана- Пика ожидает ребенка. Им известно,
- ••Если сфингомиэлин не распадается должным образом, нарушается нейронная передача. Физиологические последствия болезни Наймана-Пика
- ••Семейная пара с генетической предрасположенностью к болезни Неймана- Пика ожидает ребенка. Им известно,
- ••У беременной были получены клетки плода (путем амниоцентеза) и размножены методом тканевой культуры.
- ••При знакомстве с материалом по кинетике ферментов могло сложиться впечатление, что кинетика всех
- ••У ферментов, подчиняющимся принципам кинетики Михаэлиса и Ментен с позиций процессов, протекающих в
- ••Таким образом, природа вынуждена обратиться к "кооперативным" системам, в которых маленькие изменения в
- ••Аллостерический белок определяется как белок, содержащий два или больше топологически различающихся центра связывания
- ••Кооперативность - модификация константы связывания лиганда белком предшествующим связыванием другого лиганда. Константы связывания
- ••. Км обычно принимается как константа связывания субстрата, поскольку ее проще измерять, чем
- •Значения Vmax и Km определяются при экстраполяции линий до пересечения с осью абсцисс
- ••Два лиганда один из которых влияет на связывание другого, могут быть химически идентичны,
- •У аллостерических ферментов
- ••Аллостерический фермент содержит ряд активных центров, в самом простом случае по одному на
- •• Центральная линия графика - типичная сигмовидная кривая в отсутствии любого эффектора. В
- ••Денатурация – нарушение пространственной структуры фермента с последующей потерей активности фермента. Денатурация вызывается
- •Ингибиторы бывают разные:
- ••Среди примеров необратимо действующих ингибиторов можно назвать диизопропилфторфосфат (ДИПФФ). Это соединение вошло в
- ••Ацетилсалициловая кислота (известный всем аспирин) является необратимым ингибитором циклооксигеназы- фермента участвующего в синтезе
- ••Ингибитором синтеза протеогликанов стенки бактерий является пенилиллин, структура которого напоминает D- аланин, встраиваемый
- ••Предшествующее связывание субстрата к активному центру в свою очередь, вызывает изменения конформации центра
- •Различают два механизма конкурентного торможения.
- •Конкурентные ингибиторы не
- ••Малоновая кислота тормозит активность дегидрогеназы янтарной кислоты, занимая активный центр на ферменте. Учитывая
- •Конкурентное торможение
- ••Регуляция активности ферментов путем химической модификации: Реакции ограниченного протеолиза, аденилирования, рибозилирования, ацетилирования, фосфорилирования
- ••Активность фермента можно изменить путем ковалентной модификации его структуры.
- •Регуляция активности ферментов
- ••Гормон, циркулирующий в крови, попадает в межклеточную жидкость и контактирует с поверхностью клетки,
- ••Уровень, образовавшийся под действием АЦ, цАМФ определяется не только активностью АЦ, но и
- ••цГМФ оказывает эффекты противоположные цАМФ.
- •Изоферменты, их природа,
- ••1) скорстью катализа;
- ••Изоферменты имеют адаптивное значение, т. е. придают специфику метаболизма.
- ••Существует 5 изоферментных форм:
- ••Остальные изоферменты занимают промежуточное положение.
- •Изменение активности ферментов в онтогенезе.
- •Глюкоза утилизируется анаэробным путем (анаэробный гликолиз), т. к. ткани плода не способны к
- •3. Грудной
- •6. Зрелый.
Биологически важными нуклеофилами являются –NH2, -OH, -SH, и имидазольные группы аминокислот. Нуклеофильные формы этих групп одновременно являются основаниями. Связываясь с H+, они как основания, реагируют с электрондефицитными центрами – т.к.они нуклеофилы.
•Электрофильные реагенты :
Наиболее известными электрофилами в биохимических реакциях являются Н+, ионы Ме, углерод карбонильной группы.
•Группы радикалов аминокислот – плохие электрофилы
•По направлению реакций с учетом конечного результата можно выделить следующие типы реакций
•1. Окислительно-восстановительные.
Многие окислительно- восстановительные реакции в клетке включают разрыв С-Н связи с отнятием у атома углерода двух электронов и переносе их на акцептор, роль которого могут выполнять коферменты. Конечный акцептор электронов у аэробных организмов кислород, представляющий бирадикал с двумя неспаренными электронами
•2. Реакции кислотно- основного взаимодействия
•3.Реакции замещения
•4.Реакции отщепления
•5.Реакции перегруппировки
•6.реакции, сопровождающиеся образованием двойной связи
•Факторы, определяющие активность ферментов [E], [S], [P], Km.
•Влияние pH, [P], tº, ионной силы на активность ферментов.
• Существенное влияние на активность ферментов оказывает реакция среды. Для проявления их оптимального действия чаще всего существует узкий диапазон измерения pH среды (pH- оптимум).
•В некоторых случаях сдвиг pH на единицу снижает активность фермента на 80%. Поэтому в экспериментальных условиях работы с ферментом очень важно поддерживать pH на постоянном уровне.
Оптимум рН
Фермент |
pH |
Липаза (подж.железа) |
8.0 |
Липаза (желудок) |
4.0-5.0 |
Липаза(касторовое масло) |
4.7 |
Пепсин |
1.5-1.6 |
Трипсин |
7- 8 |
Уреаза |
7.0 |
Инвертаза |
4.5 |
Мальтаза |
6.1-6.8 |
Амилаза (подж.железа) |
6.7-7.0 |
Амилаза (солод) |
4.6-5.2 |
Каталаза |
7.0 |