Вирусологический метод

Патологический материал: носоглоточный смыв, кровь, моча, кал, органы погибшего плода.

Культивирование: в культуре клеток.

Индикация: интерференция с цитопатическим вирусом.

	заражение культуры клеток патологическим материалом
	
	через 7 - 10 дней заражают её вирусом ЭКХО или везикулярного стоматита
не развивается ЦПД		развивается ЦПД
		
есть рубивирус		нет рубивируса

Идентификация: РТГА, РН, РСК, РИФ.

Серологический метод

Определение в сыворотке крови антител с помощью РН (нейтрализации гемолитической активности вируса краснухи).

Важную роль играет определение в сыворотке пациента IgM (который свидетельствует о свежем случае заболевания, а у новорожденного - о внутриутробном заражении) с помощью ИФА.

12. Ретровирусы: характеристика и классификация семейства; вирусы иммунодефицита человека: морфология вириона, репликация; эпидемиология, патогенез, диагностика, этиотропная терапия, профилактика ВИЧ-инфекции; СПИД-ассоциированные инфекции и опухоли.

Характеристика семейства ретровирусов.

Диаметр: 90 - 120 нм. Сложные вирусы с кубическим типом симметрии. РНК 1-цепочечная, в вирионе содержатся две идентичные копии РНК, соединенные на одном конце водородными связями, ассоциированна с обратной транскриптазой.

Лабораторная диагностика вызываемых ими заболеваний затруднена. Применяют методы:

1. выделения ретравирусов в культурах клеток.

2. Обнаружение вирусных антигенов или антител к ним с помощью РИФ или ИФА.

3. Обнаружение ретровирусов путем регистрации активности обратной транскриптазы.

Уникальные особенности семейства

1. Диплоидный геном.

2. Обратная транскриптаза.

3. Функция обратной транскриптазы не подвергается контролю, поэтому фермент допускает много ошибок (высокая частота мутаций структурных белков вируса).

4. Семейство сформировано по единственному признаку - наличию обратной транскриптазы. Поэтому включает самые разнообразные вирусы.

5. В клетке РНК-геном превращается в ДНК-геном, который интегрируется в хромосому клетки-хозяина.

Вирусы иммунодефицита человека: морфология вириона, репликация; эпидемиология, патогенез, диагностика, этиотропная терапия, профилактика ВИЧ-инфекции.

Морфология вириона

Вирион имеет сферическую форму, диаметр 100 - 120 нм.

Сложный вирус, по структуре близкий другим лентивирусам.

Состоит из:

1. Суперкапсидной оболочки:

• шипы, состоящие из гликопротеина 160 (молекулярная масса в килодальтонах), который при разрезании формирует два гликопротеина: gp120 - высокоиммуногенный белок, содержащий область, связывающую молекулу СД4; gp41 - трансмембранный белок, опосредующий проникновение ВИЧ в клетки, дефицитные по СД4-молекуле

• билипидный слой

• матриксный белок

2. Сердцевины цилиндрической или конусовидной формы:

• РНК

• внутренние белки, связанные с РНК

• ферменты - обратная транскриптаза, эндонуклеаза и протеаза

• капсидные белки.

Репликация

1. Адсорбция (gp120 вируса связывается с CD4-молекулой Т-лимфоцита).

2. Проникновение путём рецепторного эндоцитоза.

3. Депротеинизация.

4. Синтез ДНК-транскрипта на матрице вирионной РНК с помощью обратной транскриптазы.

5. Та же обратная транскриптаза обеспечивает встраивание ДНК-транскрипта в хромосому лимфоцита.

6. Интегрированный ДНК-транскрипт ВИЧ может сохраняться в состоянии провируса длительное время.

7. Синтез на матрице ДНК-транскрипта вирионной РНК с помощью клеточной ДНК-зависимой РНК-полимеразы (т.е. ВИЧ, в отличие от других РНК-содержащих вирусов не может самостоятельно реплицировать свою РНК).

8. Часть пула вРНК составляет пул вирионных РНК, а часть - используется в качестве иРНК для синтеза вирусных белков.

9. Сборка вирионов.

10. Отпочковывание зрелых вирионов от клетки (при этом лимфоцит погибает из-за множественных повреждений своей наружной мембраны).

Однако, образование вирионов происходит спорадически не во всех зараженных лимфоцитах.

Эпидемиология ВИЧ-инфекции

Источник инфекции:

• больной человек

• носитель вируса (в инкубационном периоде или в стадии предСПИДа.

Пути заражения:

• половой (со спермой или влагалищной слизью)

• парентеральный (с кровью)

Патогенез ВИЧ-инфекции

		ВИЧ
инфицирование клеток

синтез инфицированными клеткамиtat-белка		конкуренция его за рецепторы фибронектина и т.д. (см. выше)		системные деструктивные процессы

продукция вируса		синтез антивирусных антител и их перекрестные реакции

сокращение популяции Т-хелперов		ингибирование Т-киллеров		опухоли
		ингибирование других иммунных реакций		оппортунистические инфекции

Диагностика ВИЧ-инфекции

1. ИФА

• Обнаружение антител (спустя 2 месяца после заражения)

• Обнаружение антигена (р24) в сыворотке, обработанной кислотой для разрушения иммунных комплексов

2. Иммуноблоттинг – подтверждающий тест. Считается положительным, если обнаружены антитела к внутренним белкам вируса, а также к гликопротеидам суперкапсидной оболочки.

3. Выделение вируса в культуре клеток

4. Обнаружение РНК вируса в ПЦР

Диагностика ВИЧ-ассоциированных инфекций проводится обычными бактериологическими методами, разбираемыми при прохождении соответствующих заболеваний.

Этиотропная терапия ВИЧ-инфекции

Лекарственные препараты, разрешенные и официально зарегистрированные FDA (Американским комитетом по контролю за лекарствами и пищевыми продуктами):

1. Ингибиторы обратной транскриптазы

А. Нуклеозидные (т.е. производные нуклеозидов, которые, встравиваясь в формируемые ДНК-транскрипт, блокируют дальнейшее наращивание его нуклеотидных последовательностей)

1. зидовудин (retrovir, азидотимидин, ZDV, AZT) – первый антиВИЧ препарат, применяемый с 1987 года.

2. диданозин (videx, DDI)

3. зальцитабин (hivid, DDC)

4. ставудин (zerit)

5. ламивудин (epivir)

Б. Ненуклеозидной природы (напрямую тормозят синтез фермента, не встраиваясь в ДНК)

1. невирапин (viramune)

2. делавирдин (rescriptor)

2. Ингибиторы протеазы ВИЧ (протеаза окончательно формирует вирусные белки и обеспечивает созревание полноценного вириона)

1. саквинавир (инвираза)

2. ритонавир (norvir)

3. индинавир (crixivan) – применяется с 1996 года, на сегодняшний день, пожалуй, самый эффективный препарат для терапии ВИЧ-инфекции; в комбинации с азидотимидином приводит не только к угасанию клиническихз симптомов, но и в ряде случаев к прекращению антигенемии)

4. нельфинавир (viracept)

В Республике Беларусь могут использоваться в клинической практике препараты, разрешенные Республиканским центром экспертиз и испытаний в здравоохранении:

1. тимозид (аналог зидовудина) – выпускается в России

2. хивид (аналог зальцитабина)

3. инвираза (саквинавир)

4. вирасепт (нельфинавир)

Общий принцип терапии СПИДа – комбинированное назначение препаратов, в зависимости от клинических проявлений инфекции и показателей иммунного статуса пациента.

Профилактика ВИЧ-инфекции

Неспецифическая профилактика СПИДа основывается на недопущении инфицирования (см. пути заражения).

Вакцины для специфической профилактики СПИДа находятся на стадии разработки.

Профилактика ВИЧ-ассоциированных инфекций проводится химиопрепаратами, к которым чувствительны их возбудители.

СПИД-ассоциированные инфекции и опухоли

Основные СПИД-ассоциированные инфекции:

• Пневмоцистная пневмония.

• Микобактериозы

• Цитомегаловирусная и др. герпетическая инфекция.

• Кандидозы (особенно – оральный).

Основные СПИД-ассоциированные опухоли:

• Лимфома Капоши (злокачественная форма)

• Первичная лимфома мозга.

13. Реовирусы: общая характеристика и классификация; ротавирусные инфекции: патогенез, иммунитет, методы диагностики.

Общая характеристика реовирусов. Простые вирусы, имеющие двухцепочечную РНК.

Классификация реовирусов.

Семейство Reoviridae состоит из трех родов:

• Reovirus – вызывают респираторные заболевания

• Orbivirus – вызывают геморрагические лихорадки (передаются трансмиссивным путем)

• Rotavirus – вызывают кишечные заболевания.

Ротавирусные инфекции: патогенез, иммунитет, методы диагностики.

Патогенез

Источником заражение являются больные с острой и бессимптомной формой инфекции, а также вирусоносители. Механизм заражения фекальнооральный. Наиболее опасны больные в первые 3-5 дней заболевания, когда в фекальных массах накапливается максимальное количество вируса. Через 7-8 дней после начала заболевания выделение вируса прекращается.

Первичная репродукция ротавирусов происходит в цитоплазме энтероцитов двенадцатиперстной кишки. При этом микроворсинки щеточной каймы клеток укорачиваются, становятся неровными или полностью исчезают, в тяжелых случаях развиваются некротические изменения стенки кишечника. Нарушается процесс всасывания простых сахаров. Воспалительные явления усиливают перистальтику кишечника, что способствует развитию диарейного синдрома и появлению рвоты.

Иммунитет

В организме больных сначала появляются IgM, которые через 2-3 недели сменяются IgG. Существенное значение в местном иммунитете принадлежит IgAS. Вируснейтрализующие антитела класса IgG способны проходит через плаценту. Они играют определенную роль в создании пассивного иммунитета в первые 6 месяцев после рождения ребенка.

Комплементсвязывающие антитела быстро исчезают после перенесенного заболевания, а вируснейтрализующие сохраняются десятилетиями.

Методы диагностики

1. Выявление в фекалиях ротавирусов.

Ротавирусы обнаруживаются в фекальных массах в 100% случаев в первые дни заболевания с помощью иммунной электронной микроскопии.

Ротавирусный антиген в феалиях выявляют с помощью ИФА, РИА, других серологических реакций, а также с помощью клонированных РНК-зондов.

2. Выявление нарастание антител в парных сыворотках. Для этого используют РТНГА, РСК, РН, ИФА, РИФ и другие серологические реакции, в которых в качестве диагностикума используют ротавирусы обезьян или телят.

14. Рабдовирусы: характеристика и состав семейства; бешенство: эпидемиология, патогенез, вирусологическая диагностика, специфическая профилактика.