Задания для самоподготовки и уирс:

• Методы культивирования вирусов в клеточных культурах и индикации вирусов в них.

• Методы культивирования вирусов в куриных эмбрионах и в организмах животных. Методы обнаружения вирусов в данных системах.

.Основная литература:

1. Букринская А.Г. Вирусология.—М.:Медицина, 1986.-336с.

2. Клиническая лабораторная аналитика./ Под ред. В.В. Меньшикова. Том IV. Частные аналитические технологии в клинической лаборатории. – М.:ООО «Агат-Мед.», 2003. – с.623-696.

3. Маянский А.Н Микробиология для врачей (очерки патогенетической микробиологии). Нижний Новгород: Изд-во НГМА, 1999.

4. Медицинская микробиология./ Под ред. В.И. Покровского. –М.:ГЭОТАР МЕДИЦИНА, 1999. – с.453-462.

5. Конспект лекций

Дополнительная литература:

1. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология: Учебник для мед. вузов./ Под ред. А.И. Коротяева, С.А. Бабичева –СПб.: СпецЛит, 2000,.

2. Общая вирусология./ Под редакцией В.М. Жданова, С.Я. Гайдамович. Москва, Медицина, 1982, т. l., т.2.

Вспомогательные материалы по теме:

а. Образцы клинического материала. Выявление, культивирование и определение количественного содержания вирусов (табл. 29-1) — «золотой стандарт» в диагностике вирусных инфекций. Однако объективные сложности — необходимость определённого времени для репродукции возбудителя (от нескольких суток до недель), необходимость содержания штата квалифицированных сотрудников и перманентный риск заражения — ограничивают применение этих методов в работе бактериологических лабораторий лечебных учреждений. Образцы следует отбирать как можно раньше либо с учётом ритма циркуляции возбудителя. При транспортировке образцы помещают в различные растворы и среды, наиболее часто в раствор Хенкса, содержащий пенициллин (100 000 ЕД/мл), гентамицин (50 мкг/мл) и амфотерицин В (40 мкг/мл). Образцы следует доставлять в лабораторию незамедлительно! При относительно кратковременной транспортировке (не более 5 сут) образцы сохраняют на льду, при более длительной — при температуре -50˚С.

Таблица

Образцы клинического материала, исследуемые при диагностике вирусных инфекций
Клинические проявления	Возможный возбудитель	Образцы, используемые в диагностике
Респираторные вирусные инфекции	Риновирусы, PC-вирус, вирус парагриппа	Смывы и мазки из носоглотки
	Аденовирусы, энтеровирусы	Смывы и мазки из зева; испражнения
	ВПГ	Смывы и мазки из зева
	Вирус Эпстайна-Барр	Сыворотка
Пневмонии	Вирус гриппа, PC-вирус	Смывы и мазки из носоглотки, промывные воды бронхов, биоптаты
	ЦМВ	Промывные воды бронхов; биоптаты, лейкоциты периферической крови
	Вирус кори	Смывы и мазки из зева; сыворотка, биоптаты лёгочной ткани
	Аденовирусы	Смывы и мазки из носоглотки, промывные воды бронхов, биоптаты лёгочной ткани, испражнения
Высыпания
Пятнисто-папулёзные	Вирусы кори, краснухи, парвовирус В19	Сыворотка
	Энтеровирусы	Смывы и мазки из зева, ректальные мазки
Везикулярные	ВПГ, вирус varicella-zoster	Мазки из везикул, содержимое везикул, биоптаты из очагов поражений
	Энтеровирусы	Мазки из везикул, содержимое везикул, биоптаты из очагов поражений, испражнения, ректальные мазки
Менингиты	Энтеровирусы	СМЖ, несвернувшаяся кровь, смывы и мазки из зева, ректальные мазки, испражнения
	Вирус эпидемического паротита	СМЖ, моча, сыворотка
\	ВПГ 2-го типа	СМЖ
	Арбовирусы	СМЖ, сыворотка
	Вирус иммунодефицита человека	СМЖ, сыворотка, мононуклеары периферической крови
Энцефалиты	Арбовирусы	СМЖ; сыворотка; мозговые ткани
	ВПГ	Биоптаты тканей мозга
	Энтеровирусы	СМЖ, несвернувшаяся кровь, смывы и мазки из зева, ректальные мазки, испражнения, ткани мозга
	ВИЧ	Ткани мозга, СМЖ, сыворотка, мононуклеары периферической крови
Гепатиты	Вирусы гепатитов A-D	Сыворотка
	Вирус гепатита Е и А	Испражнения
	ВПГ, ЦМВ, аденовирусы	Лейкоциты несвернувшейся крови, биоптаты печени
	Вирус Эпстайна—Барр	Сыворотка
Диарея	Ротавирусы, аденовирусы, вирус Норволк, калицивирусы	Испражнения
Конъюнктивиты и кератиты	ВПГ, вирус varicella-zoster(VZV)	Биоптаты роговицы
	Аденовирусы, энтеровирусы	Биоптаты роговицы, смывы и мазки из зева, ректальные мазки, испражнения
Поражения половых органов	ВПГ	Отделяемое цервикального канала и мочеиспускательного канала, отделяемое везикул
Врождённые и перинатальные поражения	ЦМВ	Моча, мазки из зева, сыворотка
	ВПГ	Мазки из зева, ректальные мазки, отделяемое везикул, СМЖ, сыворотка
	Вирус краснухи	Сыворотка
	Энтеровирусы	Мазки из зева и прямой кишки, испражнения

1. Размножение. Вирусы размножаются только в живых клетках, выделение возбудителя в заражённой культуре клеток — один из основных методов диагностики вирусных инфекций. При соблюдении определённых условий можно получить и поддерживать жизнеспособность культур большинства животных клеток. Физиологические потребности роста культур включают, заменимые и незаменимые аминокислоты, витамины, сбалансированные солевые растворы, глюкозу, буферные системы; в ряде случаев питательную среду дополняют внесением сыворотки. Большинство патогенных вирусов отличает наличие тканевой и типовой специфичности, что определяет необходимость подбора соответствующей культуры. Размножение вируса обеспечивают чувствительные, или пермиссивные, клетки. Поэтому при выделении неизвестного возбудителя производят одномоментное заражение 3-4 культур клеток, предполагая, что одна из них может оказаться пермиссивной.

А. Культуры клеток получают после диспергирования соответствующих органов и тканей, при помещении на соответствующую плоскую поверхность они обычно растут в виде монослоя.

(1)Первичные и вторичные культуры (первичнотрипсинизированные)— суспензии клеток, отбираемые после посева диспергированных тканей, часто представлены клетками смешанного типа, обладают определённой продолжительностью жизни и, как правило, не подлежат дальнейшему культивированию. Эти клетки характеризует одинаковое число хромосом. Жизнеспособность таких культур составляет 2-3 нед.

(2) Линии диплоидных клеток ограниченно пригодны к повторному диспергированию и росту (как правило, не более 20-30 пассажей, иногда до 45), сохраняя при этом жизнеспособность и не подвергаясь спонтанной трансформации.

(3) Перевиваемые линии клеток (гетероплоидные культуры) представлены клетками, подвергнувшимися длительному культивированию и спонтанным трансформациям, либо опухолевыми клетками; способны к многократному диспергированию и перевиванию.

Б. Культуры органов. Не все виды клеток способны расти в виде монослоя, в некоторых случаях поддержание дифференцированных клеток возможно только в культуре органа. Обычно это суспензия ткани, обладающей специализированной функцией, также обозначаемая термином культура ткани.

(1) Куриные эмбрионы — практически идеальные модели для культивирования некоторых вирусов (например, гриппа и кори). Следует помнить, что значительную часть противогриппозных вакцин готовят из вирусов, выращиваемых на эмбрионах, поэтому такие вакцины не следует назначать лицам, имеющим гиперчувствительность к овальбумину.

(2) Животные. При невозможности выделить и идентифицировать вирус стандартными методами in vitro инфекционный материал вводят чувствительным к возбудителю животным, и после развития типичного инфекционного процесса производят повторное заражение чувствительных клеточных, культур. Для диагностики многих вирусных инфекций ранее широко использовали чувствительных животных (наиболее часто мышей и обезьян), однако получение новых клеточных культур значительно сокращает их применение.