Лабораторна робота № 6. Колонії мікроорганізмів. Вивчення їх культуральних властивостей

1. Теоретична частина

Ознаки відмінності одного виду м/о від іншого:

Морфологічні – форма, розмір, розташування, рухливість клітин.

Тинкторіальні - відношення до фарбування за Грамом. Наявність спор.

Культуральні - характер росту культур на тверді (розмір, колір, прозорість, в'язкість, край колонії) та рідких поживних середовищах.

Колонії - скупчення м/о на поверхні МПА.

Для кожного виду м/о характерний певний зовнішній вигляд колоній, який служить діагностичною ознакою.

При опису колонії вказують вік культури, складу середовища і температуру культивування.

Колонії, що виросли на МПА спочатку дивляться неозброєним оком або через лупу. Для більш якісного дослідження використовують мікроскоп.

Колонію характеризують за такими ознаками: розмір, обриси, консистенція, колір, контури краю, поверхня, профіль, однорідність.

1. Розмір:

   1. до 1 мм – крапкові;

   2. -1-2 мм – дрібні;

   3. -2-4 мм – середні;

   4. -5 і більше мм – великі.

2. Обриси: круглі, неправильні, розетковідние, різоїдні, нітковидні, амебовидні, складчасті, складні та ін.

3. Край: гладкий, хвилястий, зубчастий, лопатевий, неправильний, війчастий, гіллястий, нитчастий, нитчастий, ворсинчастий та ін.

4. Поверхня: гладка, зморшкувата, покреслена, дрібно - і грубозерниста, волокниста.

5. Профіль: плоский, плоско-опуклий, опуклий, зігнутий, кратеровидний, який вріс в субстрат, горбистий, каплевидний, конусовидний.

6. Однорідність: однорідні і неоднорідні.

7. Консистенція: тверда, м'яка, тягуча.

2.Експериментальна частина

Матеріал та обладнання: спиртівки, бактеріологічні петлі, штативи, чашки Петрі з МПА з колоніями мікробів, термостат, етиловий спирт, світловий мікроскоп, предметні скла, набір барвників для фарбування за Грамом.

2.1. Вивчити культуральні властивості колоній м/о.Нарисувати. Заповнити таблицю.

Вид колоніїм/о

Розмір

Обрис

Краї

Поверхня

Профіль

Однорідність

Консистенція

Колір

2.2. Вивчити тинкторіальнівластивості колоній.Приготувати фіксовані мазки-препарати з різних колоній, що виросли на МПА. Пофарбувати за Грамом. Мікроскопіровативімерсійноїсистемі.Нарисувати.

3.Контрольні питання

3.1. Поняття про морфологічні ознаки для ідентифікації видів мікроорганізмів.

3.2. Поняття про тинкторіальні ознаки для ідентифікації видів мікроорганізмів.

3.3. Поняття про культуральні ознаки для ідентифікації видів мікроорганізмів.

Лабораторна робота № 7. Стерилізація. Методи стерилізації

1. Теоретична частина

Стерилізація - процес умертвіння в об'єкті або видалення з нього мікроорганізмів всіх видів, що знаходяться на всіх стадіях розвитку. Для стерилізації використовують такі методи:

-термічні;

-хімічні;

-стерилізація фільтруванням;

-фізичні методи стерилізації (ультрафіолетові (УФ) промені, ультразвук, радіація).

Термічні методи стерилізації

Стерилізація парою здійснюється насиченим водяною парою при надлишковому тиску 1 - 2 атм і температурі 120 ˚ С в автоклаві. Стерилізують живильні середовища МПА, МПБ, посуд, перев'язувальний матеріал, хірургічні інструменти.

Автоклавування - найшвидший і надійний спосіб стерилізації, при якому гинуть всі форми м / о і спори.

Прожарювання на полум'ї (фламбіровання) - використовують при стерилізації дрібних металевих та скляних предметів (бактеріологічні петлі, пінцети, предметні скла). Відбувається згорання всіх видів м/о.

Кип'ятіння - простий спосіб стерилізації металевих та скляних предметів (голок, шприців, хірургічних інструментів, гумових трубок та ін.) Кип'ятіння триває від 15-30 хв. до 2 годин при t = 100 ˚ С.

Стерилізація текучим пором застосовується в тих випадках, коли стерилізується матеріал змінює свої властивості при температурі понад 100 ˚ С. Таким способом стерилізують вітаміни, вуглеводи, молоко. Проводиться в апараті Коха або в автоклаві з незакріплений кришкою. Стерилізується об'єкти прогрівають на водяній бані 15-60 хв при t = 60 - 90 ˚ С. Для повного знищення спорзастосовують дробову стерилізацію: нагрівають стерилізується матеріал текучим парою при 100 ˚ С 30 хв 3 рази через кожні 24 години.

Тіндалізація - вид дробової стерилізації. Що застосовується до об'єктів, розкладаються при 100 ˚ С (вітаміни і т.д.). Об'єкти стерилізують по 60 хвилин 3 -5 раз при t = 60 - 80 ˚ С.

Пастерізація - прийом часткової стерилізації. Застосовують для рідких середовищ, які змінюють свої фізико-хімічні властивості при високій температурі. Пастеризації піддають харчові продукти: молоко, вино, пиво, соки та ін При пастеризації повністю зберігаються вітаміни і смакові якості продуктів.Пастеризовані продукти довго не зберігаються так як, при цьому способі вегетативні форми м / о гинуть, а спори залишаються. У мікробіологічної лабораторній практиці пастеризацією відокремлюють спороутворюючі види бактерій від неспороутворюючих. Пастеризацію проводять на водяній бані при t = 60 - 80 ˚ С протягом 10-30 хвилин.

Хімічні методи стерилізації

Хімічна стерилізація (дезінфекція) - знищення патогенних мікробів за допомогою отруйних речовин (антисептиків). Рекомендується для виробів з полімерних матеріалів, гуми, скла, корозійно-стійких матеріалів.Для стерилізації використовуються гази і дезінфіцірующте розчини: окис етилену, перекис водню, спирти, кислоти, фенол. Стерилізацію дезрастворе проводять у закритих ємностях зі скла, пластмаси, емальованих ємностях. Вироби повністю занурюють у дезрастворе і витримують від 1 до 24 годин. Після цього вироби повинні бути промиті стерильною водою в асептичних умовах.

Стерилізація фільтруванням

Розчини термолабільних речовин (розчини білків, сироватки, деякі вітаміни) стерилізують фільтруванням за допомогою мембранних і глибинних фільтрів. Діаметр пір мембранних фільтрів не перевищує 0,3 мкм. Для фільтрів використовують синтетичні полімери, целюлозу, волокнисті матеріали (бавовна, вовна, азбест).Фільтрування ведуть в умовах вакууму або під тиском.

Фізичні методи стерилізації

Фізичні методи (УФ-промені, ультразвук, радіоактивне випромінювання) використовують для стерилізації термолабільних матеріалів. Високі дози випромінювання вбивають більшість патогенних організмів. УФ-промені (діапазон 200-280 нм) бактерицидні і застосовуються для дезінфекції повітря в приміщеннях, стерилізації виробів з полімерів і т.д. Радіаційна стерилізація рекомендована для стерилізації виробів одноразового використання в упаковці, перев'язувальних матеріалів, виробів із пластмас. Опромінення проводять на різних установках іонізуючого опромінення (дози до 25 кГр).

2. Експериментальна частина

Матеріал та обладнання: спиртівки, бактеріологічні петлі, штативи, чашки Петрі з МПА, термостат, культура м/о, УФ-бокс, фольга, етиловий спирт, світловий мікроскоп, предметні скла, набір барвників для фарбування за Грамом.

Вивчення антибактеріальної дії УФ-променів

2.1. Провести посівпопередньо ідентифікованої культурим/о(приготування фіксованого мазка-препарата, фарбування по Граму) на чашку Петрі з МПА.Посів проводиться в стерильних умовах у боксі

2.2.Половину чашки Петрі закрити стерильною фольгою.

2.3. Провести опромінення відкритої частини чашки Петрі бактерицидної лампою протягом 30 хв.

2.4.Інкубувати посів у термостаті протягом доби при температурі 37˚ С. Про ступінь антибактеріальної дії УФ-променів судять по відсутності росту бактерій на опроміненій половині чашки Петрі.

3. Контрольні питання

3.1. Методи термічної стерилізації (автоклавування, фламбіровання, пастеризація, тіндалізація та ін.).

3.2. Хімічні методи стерилізації. Дезінфекція. Асептика та антисептика.

3.3. Стерилізація фільтруванням.

3.4. Фізичні методи (УФ-промені, ультразвук, радіоактивне випромінювання).