Лабораторна робота № 1. Імерсійна мікроскопія. Техніка мікроскопіювання

1. Теоретична частина

Будова світлового мікроскопу

Мікроскоп – оптичний пристрій для вивчення малих об’єктів, які недоступні до бачення неозброєним оком. Конструктивно світловий мікроскоп складається з трьох частин: оптичної, механічної та освітлювальної.

Механічна частина мікроскопу

0. тубус, служить для встановлення об΄єктиву та окуляру однієї оптичної осі та певний відстані один від одного

1. окуляр, знаходиться у верхній частині тубусу

2. револьверний механізм з об΄єктивами кріпиться до нижньої частини тубусу та складається з двох дисків. До нижнього диску угвинчені об΄єктиви.

3. тубусотримач

4. предметний столик на який поміщують дослідний препарат. В центрі столик є отвір для проходження світлових промінів, які висвітлюють препарат.

5. макрогвинт - це парний гвинт для макронастройки.

6. мікрогвинт - для мікронастройки мікроскопу, щоб отримати зображення дослідного препарату. При одному повному обороті зміщення складає 0,1 мм. При наводці мікроскопу дозволяється робити мікрогвинтом обертання лише на 1,5-2,0 обороту в один або другий бік!

Оптична система мікроскопу

До оптичної частини входить: оптична збільшувальна та освітлювальна частини. Оптична збільшувальна частина складається з об΄єктиву та окуляру.

Об΄єктив - є основною та найважливішою частиною, яка складається з склеєних канадським бальзамом лінз, які поміщені у металічний корпус. Та лінза, яка звернена до препарату, називається фронтальною. Маються також так звані корекційні лінзи, які дають більше збільшення та усувають аберації. Аберації бувають. Існують два типі аберації: сферична та хроматична.

За способом застосування об΄єктиви поділяються на сухі (сухо-повітряні) та імерсійні. При сухий системі між препаратом та об΄єктивом знаходиться повітря, а при імерсійної – олія, яка наноситься на препарат перед мікроскопіюванням. «Імерсія» - це «занурення». Імерсійну систему застосовують для об΄єктивів, які збільшують у 90 разів.

При імерсійної системі відхилення променя при виході з предметного скла є можливість цього уникнути, так як коефіцієнт заломлення олії 1,515, якій майже дорівнює коефіцієнту заломлення скла. Таким чином, при імерсійної системі до об΄єктиву мікроскопу попадає більша кількість світлових променів, а ступень освітлення – збільшується.

Оптичні характеристики об΄єктивів:

- ступень збільшення;

- фокусна відстань;

- числова апертура;

- роздільна здатність.

Ступень збільшення – вказана на корпусі об΄єктиву. Для імерсійної мікроскопії використовується об΄єктив з 90- кратним збільшенням.

Фокусна відстань – має розміри від 1,3 до 60 мм. Чим більше збільшення лінзи, тим більше її кривизна і менше фокусна відстань.

Роздільна здатність - це здатність відображати найдрібніші деталі досліджуваного матеріалу.

Числова апертура – це множення показника заломлення середовища (повітря – 1,000; олія – 1,515) на синус кута, якій утворюється крайовими променями, яків ходять в об΄єктив через фронтальну лінзу. Числова апертура вказана на корпусі об΄єктиву.

Окуляр – це пристрій, якій складається з двохлінз. Верхня лінза для ока, а нижня – збиральна. Для імерсійної мікроскопії використовується окуляри збільшенням 15х разів.

Загальне збільшення мікроскопу = 90 х 15 = 1035 разів.

Освітлювальна система мікроскопу знаходиться під предметним столиком. Складається з дзеркала, ірис-діафрагми та конденсора. Дзеркало направляє промені світла від джерела світла на препарат. Дзеркало з одного боку пласке (денне світло), з другого – увігнуте (використання штучного освітлення). За допомогою цього регулюється ступень освітленості препарату.

Ірис-діафрагма складається з набора тонких сегментних пластинок, які можливо здвигати та розсовувати за допомогою важелю, що змінює розміри отвору в центрі діафрагми та ступінь освітлення.

Конденсор складається з двох лінз: з верхньої – плоско-опуклої та подвійно-опуклої. Світлові промені проходять через конденсор та збираються в пучок (конденсуються). При роботі з офарбованими препаратами конденсор повинний бути розташований у найбільш верхнє положення, а ірис-діафрагма повинна бути повністю відкрита. При мікроскопіюванні нефарбованих препаратів конденсор опускають.

Техніка мікроскопіювання

1. Розмістити мікроскоп для зручної роботи.

2. Провірити ірис-діафрагму.

3. Перевести конденсор до верхнього положення.

4. Встановити дзеркало. Положення повинно бути таким, щоб на верхньої лінзі конденсора з΄явилось світло.

5. Обертаючи револьвер встановити об΄єктив на 8х. Освітленість провіряють за допомогою цього об΄єктива.

6. Помістити на столик мікроскопу дослідний препарат. При мікроскопуванні офарблених фіксованих препаратів завжди використовують імерсійну систему. На препарат нанести краплю олії.

7. Обертаючи макрогвинт вести спостереження з боку, опускаючи об΄єктив до дотикання його з олією.

8. Дивлячись в окуляр провести наводку.

9. Вивчити препарат.

10. Підняти об΄єктив догори. Витерти олію з фронтальної лінзи. Встановити револьверний механізм на заглушку та опустити додолу.

2. Експериментальна частина

Матеріал та обладнання: світловий мікроскоп, імерсійна олія, готовий дослідний мікропрепарат.

2.1. Зарисувати мікроскоп з імерсійним об΄єктивом. Вивчити будову мікроскопу.

2.2. Провести пробне мікроскопування готового дослідного мікропрепарату.

3.Контрольні питання

3.1. Поняття про імерсійну мікроскопію.

3.2. Типи аберацій.

3.3. Оптичні характеристики об΄єктивів.

3.4. Правила мікроскопування.