- •Одесский государственный медицинский университет
- •Тема 1: микроскоп. Микроскопические приборы.
- •В. Флюоресцентный микроскоп
- •А. Электронный микроскоп
- •С. Фазово-контрастный микроскоп
- •В.Темнопольныймикроскоп с.Ультрафиолетовый микроскоп. Д.Поляризационный микроскоп
- •С.Фазово-контрастная микроскопия
- •Д. Поляризационная микроскопия
- •Тема 2: гистологическая техника
- •Микроскопическая техника.
- •I прижизненные методы
- •Метод культивирования
- •Б. Прижизненное исследование клеток в организме (in vivo)
- •II посмертные методы
- •Приготовление постоянного гистологического препарата
- •Особенности приготовления замороженных срезов
- •Особенности приготовления материала для электронномикроскопического исследования
- •Гистологические красители
- •II Посмертные
- •2. Специальные
- •Специальные методы обработки тканей.
- •5. Авторадиография.
- •Тема 3: цитология. Поверхностный комплекс клетки.
- •Тема 4: цитология. Цитоплазма, ее структура и функции.
- •Тема 5. Цитология. Ядро. Клеточный цикл. Деление клеток. Рост, созревание, старение и смерть клеток.
- •Тема 6. Сравнительная эмбриология. Ранние этапы эмбрионального развития позвоночных.
- •Тема 7: сравнительная эмбриология . Развитие, строение и функции провизирных органов позвоночных.
- •Тема 8: диагностика микропрепаратов 1 Перечень препаратов, вынесенных на диагностику
- •Перечень электронных микрофотографий, вынесенных на диагностику
- •Содержательный модуль 2 общая гистология
- •Тема 9: понятие о тканях. Эпителиальная ткань. Однослойный
- •В. Трансэпителиального транспорта
- •С. Каемчатого эпителия
- •С. Микроворсинчатые
- •Тема 10: многослойный и железистый эпителий
- •Тема 11: ткани внутренней среды. Кровь. Эритроциты. Тромбоциты.
- •Тема 12: кровь. Гранулярные лейкоциты.
- •Тема 13: кровь. Агранулярные лейкоциты. Лимфа.
- •Тема 14: эмбриональный и постэмбриональный гемоцитопоэз
- •В Гранулоцитарного
- •Тема 15: собственно соединительные ткани. Клетки
- •Тема 16: межклеточное вещество соединительной ткани. Плотная соединительная ткань. Соединительная ткань со специальными свойствами
- •В. В стекловидном теле
- •Тема 17: скелетные ткани. Хрящевая ткань
- •Тема 18: костная ткань. Строение.
- •Тема 19: эмбриональный остеогистогенез. Возрастные особенности, рост и перестройка костей
- •Тема 20: мышечные ткани. Скелетная мышечная ткань
- •Д. Гладкой
- •Тема 21: мышечные ткани. Сердечная. Гладкая
- •Тема 22: нервная ткань. Нейроциты. Нейроглия
- •Тема23: нервная ткань. Нервные волокна и окончания
- •С. Нейрофибриллы
- •D. К дегенерирующему
- •Тема 24. Диагностика микропрепаратов 2. Перечень микропрепаратов, вынесенных на диагностику 2
- •Перечень электронных микрофотографий, вынесенных на диагностику 2
- •Вопросы, вынесенные на итоговый контроль усвоения модуля 1 Содержательный модуль 1: цитология с основами общей эмбриологии.
- •Содержательный модуль 2: общая гистология
Особенности приготовления замороженных срезов
Обычная гистологическая заливка длится около 7 суток, но в некоторых случаях требуется быстрая, немедленная диагностика препарата (cito!). В таких случаях используется метод заморозки. Изъятую, но нефиксированную ткань замораживают в специальных камерах – криостатах. С помощью воды формируется ледяной блок (аналог парафинового). В криостатную камеру вмонтирован микротом, с помощью которого изготавливают замороженные срезы. При комнатной температуре они оттаивают и пригодны для немедленной гистологической окраски. Такой метод позволяет оценить структуру препарата в течение нескольких минут – до получаса. Однако метод имеет существенный недостаток: в процессе замораживания в ткани образуются кристаллы льда, нарушающие прижизненную структуру (искажение структуры или изображения носит название – артефакт).
Особенности приготовления материала для электронномикроскопического исследования
Особенности обусловлены субмикроскопическим и молекулярным уровнем исследования. Обычные фиксаторы вызывают грубую коагуляцию белков, что на электронномикроскопическом (ЭМ) уровне вызвало бы появление артефактов. Поэтому в ЭМ используют фиксаторы глютаральдегид или четырехокись осмия – вызывающие тонкую, нежную коагуляцию белков. В качестве уплотняющих сред используют эпоксидные смолы. Приготовление ультратонких срезов (нм) производят на специальных приборах ультрамикротомах с помощью стеклянных или алмазных ножей.
Гистологические красители
Существует несколько классификаций красителей. По происхождению красители бывают растительными, животными, минеральными. По химическим свойствам – кислыми, основными, нейтральными. Наибольшее прикладное значение имеет классификация красителей по назначению. В соответствии с этой классификацией все красители подразделяются на две группы:
I Прижизненные (см. выше)
- трипановый синий
- янус зеленый
- метиленовый синий
- конго красный
II Посмертные
Посмертные красители делятся на 2 вида: 1. Общие
2. Специальные
1. Общие красители в свою очередь делят на а) ядерные (основные),
б) цитоплазматические (кислые)
Общие ядерные красители красят ядра любых клеток в свой основной цвет. Например: 1. Гематоксилин – окрашивает ядра в фиолетово-чернильный цвет.
2. Азур – красит ядра в синий цвет.
3. Сафранин – окрашивает ядра в красный цвет.
Поскольку химическая природа ядра кислая (ДНК, РНК), ядерный краситель имеет свойства основания. В связи с этим, способность какой-либо структуры окрашиваться основными красителями называется базофилия (basis – основание, philia - любовь), а сама структура – базофильной. Высокая концентрация РНК в цитоплазме может обусловить ее базофилию.
Общие цитоплазматические красители красят цитоплазму любых клеток в свой основной цвет.
1. Эозин – красит цитоплазму в оранжево-розовый цвет.
2. Водная синька – в голубой цвет
3. Фуксин кислый – интенсивно-розовый цвет
Большинство цитоплазматических красителей являются кислыми, так как гиалоплазма дифференцированных клеток насыщена основными белками. Свойство какой-либо структуры окрашиваться кислыми красителями называется ацидофилия или оксифилия (acidicum – кислота, philia - любовь), а сама структура – ацидофильной.
2. Специальные красители связываются избирательно с определенной клеточной или внеклеточной структурой, позволяя отличить ее или выделить от сходных по строению структур. Чаще всего специальные красители применяют в тех случаях, когда исследуемое образование общими красителями не окрашивается. Например, включения жира и включения слизи при общей окраске остаются бесцветными. Использование специального красителя муцикармина позволяет окрасить слизь в красный цвет, а осмиевая кислотаокрасит жир в черный. Другие примеры:
Судан III – жир – оранжево-красный цвет
Пикриновая кислота – мышечная ткань – желтый цвет
Кармин Беста – гликоген – красный цвет
Резорцин – фуксин - эластические волокна – сине-фиолетовый цвет
Орсеин – эластические волокна – красно-бурый цвет