БХлабы / Определение специфичности амилазы

Определение специфичности действия -амилазы слюны

Принцип метода: Фермент -амилаза из слюнной жидкости катализирует гидролитическое расщепление крахмала пищи с образованием дисахарида мальтозы. Крахмал дает положительную качественную реакцию с йодом – появляется темно-синяя окраска раствора. Мальтоза этой реакции не дает.

Действие -амилазы можно обнаружить по исчезновению синего окрашивания раствора крахмала с йодом при добавлении слюны.

Оборудование и реагенты:

1. Пробирки стеклянные 3 шт.;

2. Автоматические пипетки на 5мл, 1000 мкл и 20 мкл;

3. Слюна ;

4. Раствор йода;

5. Раствор мальтозы 1%;

6. Дистиллированная вода.

Проведение анализа

Добавить в кювету	Опытная проба	Холостая проба	Стандартная проба
1. Сыворотка	5 мкл	--	--
2. Стандарт	--	--	5 мкл
3. Дистиллиро-ванная вода	--	5 мкл	--
4. Рабочий реагент	1 мл	1 мл	1 мл

Перемешать тщательно в течение 15 секунд содержимое пробирок, избегая образования пены. Инкубировать при комнатной температуре 10 минут. Измерить оптическую плотность опытной и стандартной проб против холостой пробы при длине волны 630 (590-640) нм. Окраска стабильна в течение 8 часов.

Расчет

Расчет по стандарту концентрации альбумина в сыворотке (плазме) проводят по формуле:

Аоп С (г/л) = -----------  Сст, Аст

где А_оп и А_ст – оптическая плотность опытной и стандартной проб,

соответственно;

С_ст – концентрация стандарта.

Если концентрация альбумина превышает 60 г/л (точка вне зоны линейности калибровочного графика), анализируемый образец (сыворотка или плазма) следует развести 1:1 физиологическим раствором и повторить измерение, а полученный результат расчета умножить на 2.

Клинико-диагностическое значение: