- •На правах рукописи
- •Глава 2. Материалы и методы исследования………………………………….58
- •Глава 3. Результаты исследования……………………………………………...62
- •Глава 4. Обсуждение результатов……………………………………………….88
- •Список сокращений
- •Введение
- •Глава 1. Обзор литературы
- •1.1. Изменения поведения как проявление старения мозга
- •1.1.1. Изменения поведения в онтогенезе
- •1.1.2. Изменения поведения при физиологическом старении и нейродегенеративных расстройствах
- •1.2. Возможные механизмы возрастных изменений
- •1.3. Окислительный стресс и старение мозга
- •1.3.1.Роль активных форм кислорода в физиологических процессах
- •1.3.2. Окислительный стресс в механизмах старения и патогенезе связанных с ним нейродегенеративных заболеваний
- •1.4. Антиоксиданты как геропротекторы
- •1.4.1. Адресованные в митохондрии антиоксиданты -
- •1.5. Крысы oxys – модель преждевременного старения и
- •Заключение
- •Глава 2. Материалы и методы исследования
- •2.1.Животные и методы воздействия на них
- •2.1.1. Оценка возрастных изменений поведения крыс oxys и Вистар
- •2.1.2. Магнитно-резонансная томография
- •2.1.3. Офтальмологические осмотры
- •2.1.4. Влияние антиоксидантов на поведение
- •2.2. Статистический анализ
- •Глава 3. Результаты исследования
- •3.1. Изменения поведения крыс oxys и Вистар с возрастом
- •3.1.1. Тест «открытое поле»
- •3.1.2. Приподнятый крестообразный лабиринт
- •3.1.3. Водный лабиринт Морриса
- •3.2. Поведение крыс oxys и развитие катаракты и ретинопатии
- •3.3. Магнитно-резонансная томография мозга
- •3.4. Влияние антиоксидантов на поведение крыс oxys и Вистар
- •3.4.1. Влияние антиоксидантов на поведение
- •3.4.2. Влияние длительного приёма SkQ1 на поведение крыс oxys и Вистар
- •3.4.3. Влияние SkQ1 на поведение годовалых крыс oxys и Вистар
- •Глава 4. Обсуждение результатов
- •Список литературы
2.1.2. Магнитно-резонансная томография
Магнитно-резонансная томография (МРТ) мозга крыс OXYS и Вистар в возрасте 3, 6 12 и 24 мес. выполнена в центре коллективного пользования ИЦиГ СО РАН на томографе («BioSpec 117/16», Bruker, Germany) методом спинового эха с многосрезовым сканированием - MSME (Multi Slice Multi spin Echo). При обработке данных пользовались программами ParaVision 5.0. Рассчитывали площадь аксиального среза мозга и удельную площадь его структур. На всех аксиальных срезах подсчитывали очаги демиелинизации, которые визуализировались как гиперинтенсивные точки на Т2–взвешенных изображениях.
2.1.3. Офтальмологические осмотры
Офтальмологические осмотры животных после расширения зрачков 1% тропикамидом проводились с помощью прямого офтальмоскопа «Вeta» (Германия) д.м.н. А.Ж.Фурсовой в рамках совместных исследований. Выраженность клинических проявлений катаракты и ретинопатии оценивали согласно стандартам AREDS (Age-Related Eye Disease Study grade protocol, http://eyephoto.ophth.wisc.edu). Результаты осмотров проанализированы самостоятельно.
2.1.4. Влияние антиоксидантов на поведение
Профилактический прием антиоксидантов начинали с возраста 1,5 мес. На кг массы тела животные с кормом получали витамин Е – альфа-токоферола ацетат («Уралбиофарм») - 20 или 40 мг, «Миртасол» («Сиббиотех», 25% экстракт черники, обогащенный селеном) - 20 мг сухих веществ в том числе 4,5 мг антоцианов и 1 мкг селена (суточная потребность), SkQ1 или MitoQ (синтезированы в НИИ митоинженерии МГУ) по 50 или 250 нмоль/кг массы в течение 45 дней. Поведение исследовали в возрасте 3 мес. При оценке профилактического эффекта различных доз SkQ1 (10, 50 или 250 нмоль/кг) поведение в приподнятом крестообразном лабиринте, тесте «открытое поле» изучали в возрасте 12 мес., водном лабиринте Морриса – в 16 мес. (в каждой группе n=15).
Исследование влияния SkQ1 (250 нмоль/кг в день) на животных с выраженными возрастными изменениями проведено на годовалых крысах OXYS и Вистар. В возрасте 14-15 мес. исследовали поведение в ПКЛ, ОП и ЛМ и сравнивали его с поведением одновозрастных и молодых (3 мес.) интактных животных (в каждой группе n=15).
2.2. Статистический анализ
Статистический анализ результатов проводили, используя программы Statisticа-6 для Windows, применяя однофакторный и дисперсионный ANOVA анализ с последующими post hoc сравнениями групповых средних (Newman Keul test). Как независимые рассматривали факторы «генотип», «возраст» и «препарат». Связи между параметрами выявляли корреляционным анализом (использовали ранговые корреляции Спирмена). Данные представлены как M±S.E.M. Результаты считали статистически значимыми при р<0,05.
Глава 3. Результаты исследования
3.1. Изменения поведения крыс oxys и Вистар с возрастом
На первом этапе исследования мы провели сравнение поведения крыс Вистар и OXYS в возрасте 1, 3, 12, 16 и 24 мес. Было установлено, что только в возрасте до 12 месяцев поведение крыс OXYS не зависит от свойственных им нарушений зрительной функции. Анализу зависимости поведения крыс OXYS от выраженности патологических изменений хрусталиков и сетчатки посвящен специальный раздел. Исследование ранних изменений поведения как возможного проявления преждевременного старения мозга крыс OXYS выполнено на животных в возрасте 1, 3 и 12 мес.