Продолжение лекции «Аминокислоты», 2 поток

4. Специфические реакции подлинности

4.1. Пирацетам. Реакция щелочного гидролиза. Нагревают ЛС в присутствии 10% раствора натрия гидроксида. Выделяется аммиак, обнаруживаемый по запаху или посинению влажной красной лакмусовой бумаги.

4.2. ЛС, содержащие серу: цистеин, ацетилцистеин, пеницилламин, метионин, содержащие меркапто-группу (-SH), или метилтиогруппу (-СH₃SH).

• Реакция Легаля. При взаимодействии с нитропруссидом натрия

(Na₂[Fe(CN)₅NO]) в щелочой среде образуютcя продукты, окрашенные в красный или красно-фиолетовый цвет (цистеин). При подкислении хлороводородной или уксусной кислотой окраска продуктов реакции изменяется. Например, при подкислении продукта реакции метионина серной кислотой окраска из красной переходит в красно-фиолетовую.

• Доказательство восстановительных свойств - реакции с окислителями. Продукт окисления – дисульфид (бесцветный).

2 R-SH → R-S-S-R + 2 H⁺

ЛС + CuSO₄ → черное окрашивание

ЛС + FeCl₃ → быстро исчезающее синее окрашивание

ЛС + H₃PO₄ 12 WO₃ → W₂O₅ (вольфрамовая синь)

• Реакция отличия ацетилцистеина от цистеина. Проводят кислотный гидролиз ЛС в присутствии калия дихромата, при добавлении этанола и концентрированной серной кислоты протекает реакция этерификации, образуется сложный эфир этилацетат, имеющий характерный запах.

4.3. Кислота глутаминовая.

Реакция с резорцином в присутствии концентрированной серной кислоты.

Реакция основана на свойстве кислоты глутаминовой образовывать при нагревании, в присутствии концентрированной серной кислоты (водоотнимающего средства), устойчивый пятичленный лактам (внутренний амид), который вступает в реакцию конденсации с резорцином (красно-фиолетовое окрашивание с зеленой флуоресценцией).

Нагревают кислоту глутаминовую с резорцином до зелено-коричневого окрашивания, после охлаждения прибавляют воду и раствор аммиака. Появляется красно-фиолетовое окрашивание с зеленой флуоресценцией.

4.4. Кислота аминокапроновая. Реакция окислительного дезаминирования. Проводят нагревание с хлорамином Б и фенолом. Выделившийся аммиак доказывают по образованию индофенола (синее окрашивание).

Чистота

1. Прозрачность и цветность водных растворов. 2. pH водных растворов (соответствует значению изоэлектрической точки аминокислоты – значения pH, при котором одинаковы концентрации положительно и отрицательно заряженных форм).

ЛС	pH водного раствора
Аминалон (ГАМК )	(5%) 6,5-7,5
Кислота аминокапроновая	(20%) 7,5-8,0
Метионин	(2,5%) 5,5-6,0
Кислота глутаминовая	(5%) 3,1-3,7
Цистеин	(2,5%) 4,5-5,5
Ацетилцистеин	(20%) 7,0-7,5
Пирацетам	(20%) 5,0-7,0

3. Предельное содержание общих примесей – хлоридов, сульфатов, железа; сульфатная зола и тяжелые металлы.

4. Посторонние примеси определяются методом ТСХ (кислота глутаминовая) или ВЭЖХ (пирацетам). Более подробно характеристка методов ТСХ и ВЭЖХ приведена в ГФXI издания.

ТСХ:

Пятно любой посторонней примеси на хроматограмме испытуемого раствора по совокупности величины и интенсивности окрашивания не должно превышать пятно на хроматограмме раствора сравнения (0,25 мкг) (не более 0,5 %).

ВЭЖХ:

Хроматографируют испытуемый раствор и раствор сравнения. На хроматограмме испытуемого раствора площадь пика любой примеси должна быть не более площади пика на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,1 %); суммарная площадь пиков примесей должна быть не более трехкратной площади пика на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,3 %).