14. Агглютинация спермиев

Спермии на своей поверхности несут отрицательный электрический заряд (15мВ), благодаря этому спермии отталкиваются друг от друга. Величина заряда всегда значительно выше в области хвостика, чем в области головки. В силу этого хвостики не переплетаются, а осуществляют вибрацию в такт (синхронное движение), плазма спермы образует водоворот, который придает дополнительное ускорение спермию. На поверхности - значительное количество кислорода.

Агглютинация – склеивание спермиев головками или всем телом вследствие ослабления или нейтрализации отрицательного электрического заряда. Заряд несколько выше в области хвостика. Причина потери заряда – наличие многовалентных металлов, изменение кислотности и т.д. наиболее частая причина – увеличение в сперме количества водородных ионов вследствие повышения в ней концентрации молочной кислоты. Если воздействие причины слабое или кратковременное, заряд теряется в области головки, а в области хвостика сохраняется. Они начинают соприкасаться головками, появляется явление «звездчатой агглютинации» (при рН = 5,0-6,4). Обратимое явление при добавлении цитрата натрия (1 капля). Если в течение 1-1,5 минут происходит восстановление способности к передвижению, спермии расходятся по полюсам и начинают двигаться в нужном режиме. Тотальная потеря отрицательного электрического заряда. Происходит склеивание спермиев по всей длине, штабелями. Такую сперму бракуют, так как ничего уже не поможет.

Агглютинацию способны вызывать ионы водорода и вещества белковой природы, которые называются агглютининами. Агглютинины делятся на гетероспермиоагглютинины и изоспермиоагглютинины. Гетеро – склеивают спермии других видов животных, поэтому нельзя оплодотворить свинью спермой быка.изоспермиоагглютинины вызывают агглютинацию спермиев своего вида (например, сыворотка крови коровы может агглютинировать спермиев быка).

15. Определение дегидрогеназной активности спермиев

Оценка качества спермы по обесцвечиванию метиленового синего.

Метод основан на способности спермиев обесцвечивать раствор метиленового синего при дыхании, т.е. чем больше спермиев в эякуляте, чем они активнее, тем интенсивнее происходит их дыхание и быстрее обесцвечивается раствор метиленового синего (восстановление метиленовой синьки в анаэробных условиях до лейкометиленовой под действием ферментов дегидрогеназ). При недостатке кислорода для дыхания спермии используют кислород, который присутствует в метиленовой синьке, в результате чего она обесцвечивается.

Методика

Реакция должна протекать в помещении при температуре +22-25 ̊С. Каплю спермы наносят на теплое предметное стекло, рядом добавляют каплю красителя (теплый 0,01% раствор метиленовой синьки на 1% растворе NaCl), перемешивают с помощью стеклянного капилляра, полученную смесь набирают в капиллярный столбик длиной около 2 см и перемещают в центральную часть капилляра. Обязательное условие: не должно быть соприкосновения с воздухом, в столбике 2 см не должно быть воздуха. Капилляр кладут на лист белой бумаги, учитывают расход времени на обесцвечивание раствора.

Качество спермы бывает хорошее, среднее, плохое.

Время обесцвечивания спермы быка	Время обесцвечивания спермы барана	Оценка спермы
5-10 минут	3-7 минут	Хорошая
11-30 минут	8-12 минут	Среднего качества
Более 30 минут	Более 12 минут	Плохая, для ИО непригодна