Работа 2. Подсчет лейкоцитов в исследуемой крови.

ЦЕЛЬ: Освоить методику подсчета лейкоцитов в камере Горяева, используя знания о функциях лейкоцитов и механизмах регуляции их количества в периферической крови уметь оценивать результаты лабораторного исследования количества лейкоцитов.

Методика выполнения работы. Подсчет лейкоцитов производится так же в камере Горяева, но не в малых, а в больших квадратах. Сторона такого квадрата равна 1/5 мм, а объем жидкости над каждым квадратом в камере равен 1/51/51/10=1/250мм³. Для подсчета лейкоцитов кровь разводят в 20 (10) раз 6% раствором уксусной кислоты, подкрашенной метиленовой синью. Уксусная кислота разрушает оболочки эритроцитов, благодаря чему последние не мешают подсчету лейкоцитов, а окраска ядер лейкоцитов метиленовой синью улучшает их видимость.

Последовательность выполнения работы. Обработать безымянный палец левой руки спиртом, проколоть скарификатором, снять ватным тампоном каплю крови. Выдавить следующую каплю и натянуть в капилляр смесителя для лейкоцитов до отметки 0,5. Быстро втянуть раствор уксусной кислоты до метки 11, перемешать кровь с раствором в расширенной части смесителя и заполнить счетную камеру. Лейкоциты удобнее считать при малом увеличении микроскопа (окуляр 15, объектив 20).

Сосчитать число лейкоцитов в 25 больших квадратах. Как и при подсчете эритроцитов, учитывают лейкоциты, лежащие внутри квадрата, на левой и верхней границах его и не учитывают те, которые лежат на правой и нижней границах. Вычисляют среднее количество лейкоцитов в одном квадрате. Определить количество лейкоцитов в 1 куб. мм. неразведенной крови и в 1 литре (по СИ)

ФОРМУЛА ДЛЯ ВЫЧИСЛЕНИЯ КОЛИЧЕСТВА ЛЕЙКОЦИТОВ:

где: Х - искомое число лейкоцитов в 1 мм³ крови, Л - сумма лейкоцитов в 25 больших квадратах, 20 – разведение, 1/250 - объем большого квадрата в мм³

Рекомендации к оформлению протокола. При оформлении протокола нарисовать сетку Горяева и вписать в 25 больших квадратов найденное количество лейкоцитов. Сравнить результат исследований крови с нормой. При отклонении от нормы указать возможные причины данного несоответствия.

Работа 3 определение осмотической резистентности эритроцитов.

ЦЕЛЬ: Освоить принципы метода определения осмотической резистентности эритроцитов, уметь объяснять механизмы различных видов гемолиза эритроцитов и медицинское значение показателя осмотической резистентости эритроцитов в диагностике патологии эритропоэза.

Методика выполнения работы. Под осмотической резистентностью эритроцитов понимают способность эритроцита противостоять понижающемуся осмотическому давлению. При различных заболеваниях крови резистентность эритроцитов может меняться, поэтому определение ее границ имеет диагностическое значение.

Приготовить ряд пробирок, содержащих по 1 мл. раствора хлорида натрия убывающей концентрации : 0,9 ; 0,8 ; 0,7 ; 0,6 ; 0,5 ; 0,4 ; 0,3 ; 0,2 % и пронумеровать их. В каждую пробирку добавить по капле крови. Чтобы капли были равной величины, лучше набирать кровь пипеткой от гемометра до имеющейся метки. Взболтать смесь и оставить пробирки в штативе. Через час после добавления эритроцитов в раствор оценить результат.

Рекомендации к оформлению протокола. Результаты наблюдения занести в таблицу:

концентрация раствора в %	0,9	0,8	0,7	0,6	0,5	0,4	0,3	0,2
результаты

При полном гемолизе раствор равномерно окрашен и совершенно прозрачен, что отмечается знаком (+). При частичном гемолизе на дне пробирки оседают наиболее устойчивые эритроциты, часть же эритроцитов разрушается и окрашивает раствор. При взбалтывании пробирки раствор мутнеет, что отмечают знаком плюс-минус (+ -). При отсутствии гемолиза раствор становится бесцветным а все эритроциты оседают на дно, что отмечают знаком минус (-). В выводах определить верхнюю и нижнюю границы осмотической резистентности эритроцитов и сравнить их с нормой. Указать факторы, влияющие на осмотическую резистентность и причины возможного отклонения от нормы полученного результата.