Лабораторная работа №3 (1)
.pdfЛабораторная работа № 3
Исследование активности амилазы слюны и ее свойств
Цель лабораторной работы: Изучить ферменты как биологические катализаторы, их особенности, строение и свойства. Изучить свойства амилазы слюны.
Приготовить разведение слюны в 10 раз. Для этого в мерную пробирку собирают 1 мл слюны (предварительно полость рта споласкивается водой) и доводят водой до метки 10 мл.
1. Определение термолабильности амилазы слюны
Реактивы, исследуемый материал: 1) слюна, разведенная дистиллированной водой (1:10); 2) 1% раствор крахмала; 3) дистиллированная вода; 4) 3 0% раствор гидроксида натрия; 5) 7% раствор сульфата меди; 6) раствор Люголя.
Ход работы.
Реактивы, |
|
|
Пробирки |
|
|
исследуемый материал |
|
№ 1 |
№ 2 |
|
№ 3 |
Слюна 1:10, капли |
|
10 |
- |
|
- |
Кипяченая слюна, капли |
|
|
|
|
|
(кипятить 2 мл разведенной |
слюны 1-2 |
- |
10 |
|
- |
мин, охладить) |
|
|
|
|
|
Н2О, капли |
|
- |
- |
|
10 |
Крахмал 1%, капли |
|
10 |
10 |
|
10 |
Поместить в термостат на 10 минут при температуре 38 С |
|
||||
|
|
|
Окраска |
|
|
Реакция с йодом: 5 капель раствора из |
|
|
|
|
|
пробирки + 1 капли раствора I2 |
в KI. |
|
|
|
|
Реакция Троммера. |
|
|
|
|
|
Вывод |
|
|
|
|
|
Реакция Троммера
К содержимому исследуемого раствора добавляют равный объем 30% раствора NaOH и 1 каплю 7% раствора CuSO4 , следя за тем, чтобы капли не растекались по стенкам пробирки до появления в верхнем слое неисчезающей голубой мути вследствие образования гидроксида меди (II) Cu(OH)2. Затем осторожно, не встряхивая пробирку, нагревают еѐ на горелке. При кипячении выпадает желтый осадок гидроксида меди (I) CuOH или красный осадок Cu2O. В случае избытка CuSO4 образуется черный осадок CuO.
2. Определение оптимума рН для действия амилазы
Реактивы, исследуемый материал: 1) слюна, разведенная дистиллированной водой (1:10); 2) фосфатные буферные растворы (рН 6,0-8,0); 3) 0,5% раствор крахмала; 4) раствор Люголя.
Реактивы, |
|
|
Пробирки (рН) |
|
|
||
№ 1 |
№ 2 |
№ 3 |
№ 4 |
№ 5 |
№ 6 |
||
исследуемый материал |
|||||||
(6,0) |
(6,4) |
(6,8) |
(7,2) |
(7,6) |
(8,0) |
||
|
|||||||
Буферный раствор, мл |
2,0 |
2,0 |
2,0 |
2,0 |
2,0 |
2,0 |
|
Крахмал 0,5%, мл |
1,0 |
1,0 |
1,0 |
1,0 |
1,0 |
1,0 |
|
Слюна, 1:10, мл |
1,0 |
1,0 |
1,0 |
1,0 |
|
1,0 |
1,0 |
Поместить в термостат на 10 мин, температура 37С |
|
|
|||||
Раствор I2 в KI, капли |
1 |
1 |
1 |
1 |
|
1 |
1 |
Окраска |
|
|
|
|
|
|
|
Вывод |
|
|
|
|
|
|
|
Указания к оформлению лабораторной работы
Ход работы оформите в виде таблиц, и сделайте выводы о свойствах амилазы слюны (термолабильность, оптимум рН).
Контрольные вопросы по лабораторной работе
1.При каких оптимальных условиях следует определять активность ферментов? Что понимают под температурным оптимумом и чему он равен?
2.Как изменяется скорость реакции при изменении рН и почему? Что понимают под оптимумом рН и чему он равен?