Экспериментальная часть

4.2 Качественные реакции на витамины

Цель работы: изучение роли и значения витаминов в питании человека, освоение методов определения витаминов в продуктах.

Объекты исследования: сок, растительное масло, рыбий жир, молоко, витаминный комплекс.

Задание для выполнения: провести качественные реакции на водорастворимые витамины – тиамин (В₁), рибофлавин (В₂), ниацин (РР), пантотеновая кислота (В₅), В₆ (пиридоксин), Р (рутин), L-аскорбиновая кислота (витамин С). Провести качественные реакции на жирорастворимые витамины – витамин А, витамин Е (а-токоферол). Результаты наблюдений оформить в виде таблицы, сделать выводы.

4.2.1 Водорастворимые витамины

4.2.1.1 Реакции на витамин в1 (тиамин)

Реакция с диазореактивом

Принцип реакции: в основе реакции лежит способность витамина В₁ в щелочной среде с диазореактивом (смесь солянокислого или сернокислого раствора сульфаниловой кислоты с раствором нитрита натрия) образовывать сложное комплексное соединение оранжевого или красного цвета.

Материалы и реактивы: 1%-ный раствор сульфаниловой кислоты, 5%-ный раствор нитрита натрия, 10%-ный раствор бикарбоната натрия, тиамин в порошке или 5%-ный его раствор.

Оборудование: штатив с пробирками, пипетки, скальпель.

Порядок выполнения работы: в пробирку приливают 1 см³ раствора сульфаниловой кислоты и 1 см³ раствора нитрита натрия. Образуется диазореактив. Сюда же вносят небольшое количество (на кончике скальпеля) порошка или 0,5 см³ раствора тиамина и по стенке пробирки осторожно добавляют 1 см³ раствора Na₂CO₃.

На границе двух жидкостей наблюдают появление кольца оранжевого или красного цвета.

Реакция окисления тиамина в тиохром

Принцип реакции: витамин В₁ в щелочной среде под действием гексоцианоферрата (III) калия (K₃Fe(CN)₆) окисляется в тиохром – пигмент жёлтого цвета, который в изобутиловом спирте даёт интенсивно синюю флюоресценцию:

Тиамин

Тиохром

Материалы и реактивы: тиамин в концентрации 5 мкг в 1 см³, 30%-ный раствор гидроксида натрия (NaOH), 1%-ный раствор K₃Fe(CN)₆, изобутиловый спирт.

Оборудование: источник ультрафиолетового излучения (флюороскоп), штатив с пробирками, пипетки.

Порядок проведения работы: к 1 см³ раствора витамина В₁ (исследуемого вещества) прибавляют 2 см³ смеси (1 см³ раствора K₃Fe(CN)₆ и 1 см³ раствора NaOH), тщательно перемешивают и оставляют на три минуты. Затем прибавляют 5 см³ изобутилового спирта, энергично и равномерно встряхивают в течение 2 мин. Изобутиловый экстракт тиохрома в ультрафиолетовых лучах имеет интенсивную синюю флюоресценцию.

4.2.1.2 Реакция восстановления витамина в2 (рибофлавина)

Принцип реакции: образующийся при добавлении металлического цинка к концентрированной соляной кислоте водород восстанавливает жёлтый рибофлавин сначала в родофлавин (промежуточное соединение) красного цвета, а затем в бесцветный лейкофлавин.

Окисленная форма	Восстановленная форма

Материалы и реактивы: концентрированная соляная кислота (НСl), металлический цинк, 0,025%-ный раствор витамина В₂ (взвесь рибофлавина в воде).

Оборудование: пробирки, пипетки.

Порядок выполнения работы: в пробирку приливают 1 см³ раствора витамина В₂, 0,5 см³ концентрированной соляной кислоты и опускают кусочек металлического цинка. Выделяющийся водород реагирует с рибофлавином, восстанавливая его, и жидкость постепенно окрашивается в розовый цвет, а затем обесцвечивается. При взбалтывании обесцвеченного раствора лейкофлавин вновь окисляется кислородом воздуха в рибофлавин.

Наблюдают постепенное окрашивание жидкости в розовый цвет и её дальнейшее обесцвечивание.