Биохимия 2009

30

Препараты витамина В1 выпускаются в порошке, драже, таблетках, ампулах, в таре, предохраняющей от действия света.

Реактивы: тиамин хлорид (витамин В1), раствор сульфаниловой кислоты 5М, раствор нитрата натрия 5%, раствор карбоната натрия 10%.

Ход определения: В пробирку содержащую 5 капель сульфаниловой кислоты добавить 5 капель нитрата натрия. К полученному раствору добавить на кончике шпателя тиамин хлорид.

Затем необходимо прилить 5-7 капель раствора карбоната натрия. В присутствии витамина В1 жидкость окрашивается в розовый цвет.

Опыт 2.: Анализ витамина В2. Восстановление рибофлавина выделяющимся водородом.

Витамин В2 (рибофлавин) содержится в молоке, дрожжах, печени, зерне, мясе, яйцах, шпинате, томатах.

Рибофлавин учавствует в синтезе белков и жиров, оказывает влияние на состояние нервной системы, необходим для роста и восстановления тканей живого организма. Широко применяется длялечения заболевания глаз и дерматитов.

Витамин В2 мало растворим в воде, но хорошо в щелочных растворах.

Реактивы: рибофлавин, соляная кислота (конц.), цинк (металлический), дистиллированная вода.

Ход определения: Растворить 1/10 часть таблетки рибофлавина в 0,5 мл воды. Затем добавить в раствор 10 капель концентрированной соляной кислоты и небольшой кусочек металлического цинка.

В присутствии витамина В2 жидкость постепенно окрашивается в розовый цвет, а затем обесцвечивается.

ВОПРОСЫ ДЛЯ ПОВТОРЕНИЯ

1.Назовите главные источники витамина В1.

2.Как необходимо хранить витамин В1? С чем это связано?

3.Для чего необходим организму витамин В1.

4.Назовите главные источники рибофлавина.

5.Назовите характерную реакция для определения витамина

В1.

30

31

6. Назовите характерную реакция для определения витамина

В2.

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА № 9

Качественный анализ витамина С. Аскорбиновая кислота (витамин С)представляет собой

кристаллический порошок белого цвета, хорошо растворимого в воде.

Особенно богаты витамином С зеленый грецкий орех, плоды шиповника, черной смородины, капуста, лимоны, апельсины, лук, чеснок, картофель.

Витамин С повышает иммунитет организма, полезен при пониженной роботоспособности и при различного рода кровотечениях.

Витамин С не накапливается в организме, поэтому его необходимо применять регулярно.

Нерационально совместное применение витамина С с сульфаниламидными препаратами, добавки аскорбиновой кислоты в мясные продукты тоже не безобидны.

Определение аскорбиновой кислоты основанно на ее способности вступать в окислительно восстановительные реакции и восстанавливать, например, гексацианоферрат (III) калия. При последующем добавлении хлорида железа (III) образуется берлинская лазурь, окрашивающая раствор в синий цвет.

Аскорбиновая кислота восстанавливает нитрат серебра до серебра (темный осадок), а йод до йодоводорода.

При действии на аскорбиновую кислоту метиленовой сини, последняя восстанавливается до бесцветного соединения.

Опыт 1.: Реакция с нитратом серебра.

Реактивы: раствор аскорбиновой кислоты 0,002%, раствор нитрата серебра 0,1н.

Ход определения: В пробирку налить 1 мл раствора аскорбиновой кислоты, после чего добавить в нее 2 капли раствора нитрата серебра. При этом наблюдается образование осадка серого цвета.

Опыт 2.: Реакция с красной кровяной солью.

Реактивы: раствор аскорбиновой кислоты 0,002%, раствор красной кровяной соли 5%, дистиллированная вода, раствор

31

32

хлорида железа (III) 1%.

Ход определения: Налить в первую пробирку 2-3 мл раствора аскорбиновой кислоты, во вторую пробирку для контроля 2-3 мл дистиллированной воды.

Добавить в обе пробирки по 5 капель красной кровяной соли и по 5 капель раствора хлорида железа (III). При этом раствор аскорбиновой кислоты приобретает синее или зеленое окрашивание, а затем дает темно-синий осадок – берлинскую лазурь.

В пробирке с водой раствор имеет бурую окраску.

Опыт 3.: Реакция с раствором йода.

Реактивы: раствор аскорбиновой кислоты 0,002%, раствор иода 0,1 н.

Ход определения: Поместить в пробирку 5-6 капель раствора аскорбиновой кислоты, добавить 1-2 капли йода. При этом должно наблюдаться обесцвечивание раствора.

Опыт 4. Анализ растительных объектов на наличие витамина С.

Реактивы: сок капусты (картофеля), гидроксид калия 10%, раствор гексоцианоферрата (III) калия, раствор хлорида железа (III) 1%, раствор соляной кислоты 10%.

Ход определения: Налить в пробирку 1 мл капустного (картофельного) сока, добавить 2 капли раствора гидроксида калия. Затем добавить 2 капли раствора гексоцианоферрата (III) калия и энергично встряхнуть содержимое пробирки.

После того добавить 6-8 капель раствора соляной кислоты и 1- 2 капли раствора хлорида железа (III).

Отметьте выпадение синего или зеленовато-синего осадка. Результаты опыта оформляют в тетради для лабораторных

работ в виде таблицы.

32

33

I2 (раствор)

Метиленовая синь

ВОПРОСЫ ДЛЯ ПОВТОРЕНИЯ

1.Каковы физические свойства аскорбиновой кислоты?

2.Какие изменения наблюдаются в организме при недостатке витамина С?

3.Какие химические свойства лежат в основе анализа аскорбиновой кислоты.

4.К какому из видов витаминов – жирорастворимые или водорастворимые относят витамин С.

5.Какие виды растительного сырья наиболее богаты витамином С?

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА № 10.

Качественный анализ витаминов D, Р.

Опыт 1.: Качественный анализ витамина D. Реакция с бромом.

Витамин D (кальциферол)регулирует обмен кальция и фосфора, входящих в состав зубной и костной ткани. Витамин D используют для лечения рахита, костных заболеваний, вызванных нарушением кальциевого обмена, туберкулеза и кожных заболеваний.

Кальциферол содержится в больших количествах наряду с витамином А в печени и жировой ткани рыб, в яичном желтке. В овощах, фруктах, зерновых культурах он не содержится.

Кристаллический витамин D не стоек при хранении, но в маслянных растворах, защищенных от света, сохраняет свою активность в течении нескольких лет. Витамин D легко разрушается в кислой среде.

Реактивы: рыбий жир, сливочное масло (или куриный желток), раствор брома.

Ход определения: Налить в первую пробирку 2 мл рыбьего жира, а в другую 2 мл сливочного масла или куриного желтка. Затем необходимо добавить в обе пробирки по 6-8 капель брома. В

33

34

присутствии витамина D должно появиться зеленоватоголубое окрашивание.

Опыт 2.: Качественный анализ витамина D. Реакция с анилином.

Реактивы: рыбий жир, раствор анилина в концентрированной соляной кислоте (15:1) (приготавливается перед использованием).

Ход определения: Налить в пробирку 6-8 капель рыбьего жира и добавить столько же раствора анилина. Раствор перемешать. Затем раствор нагреть до кипения и прокипятить 0,5 минут.

При наличии витамина D желтая эмульсия делается зеленой, а затем красной. Через одну - две минуты эмульсия делится на два слоя, из которых нижний окрашен в красный цвет.

Полученные данные запишите в таблицу 9.

Рыбий жир

Сливочное масло (куриный желток)

Опыт 3.: Качественный анализ витамина Р.

Витамин Р является не одним веществом, а целым комплексом витаминов. В лимонах содержится один из них — цитрин. Из гречихи выделяют — рутин. К группе Р-витаминного действия относят так же кверцетин, который содержится в листьях чая.

Витамин Р повышает эластичность капиллярных сосудов и понижает их проницаемость. Витамин Р помогает в профилактике атеросклероза, гипертонической болезни и ревматизма, а так же нормализует деятельность щитовидной железы, обладает

34

35

свойством ослаблять чувство жажды.

Источниками витамина Р являются: черноплодная рябина, черная смородина, шиповник, укроп, петрушка, лимон и т.д..

Реактивы: раствор хлорида железа (III) 1%, водный раствор рутина.

Ход определения: Налить в пробирку 1-2 мл насыщенного водного раствора рутина. Прибавить 5-6 капель раствора хлорида железа (III). При наличии витамина Р возникает зеленое окрашивание.

ВОПРОСЫ ДЛЯ ПОВТОРЕНИЯ

1.В каких продуктах питания содержится витамин D?

2.К чему приводит недостаток витамина D?

3.Каковы химические свойства витамина D?

4.Назовите главные источники витамина D.

5.В виде каких веществ представлен витамин Р?

6.Для чего необходим витамин Р? К чему приводит его недостаток?

7.Назовите функции витамина Р.

8.Назовите главные источники витамина Р.

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА № 11.

Качественный анализ витаминов E, К.

Опыт 1.: Качественный анализ витамина Е. Реакция с азотной кислотой.

Витамин Е — токоферол, содержатся как в животных, так и в растительный продуктах. Его много в зародышах пшеницы, хлопковом масле, яичном белке, в семенах яблок.

Витамин Е — один из самых стойких витаминов, он не разрушается при кипячении, действии кислот, щелочей, не окисляется кислородом воздуха.

Реактивы: α—токоферол 0,1% (в спирте), азотная кислота

(конц.).

Ход определения: Налить в пробирку 4-5 капель спиртового раствора α—токоферола, добавить 10 капель концентрированной азотной кислоты. Содержимое перемешать.

Затем поместить пробирку в водяную баню, нагретую до 70 С.

35

36

При наличии витамина Е образуется эмульсия, которая постепенно расслаивается. Верхний маслянистый слой приобретает красную окраску.

Опыт 2.: Качественный анализ витамина Е. Реакция с хлоридом железа (III).

Реактивы: α—токоферол 0,1% (в спирте), раствор хлорида железа (III).

Ход определения: Налить в пробирку 4-5 капель спиртового раствора α—токоферола, добавить 0,5 мл раствора хлорида железа (III) и содержимое пробирки перемешать.

Затем поместить пробирку в водяную баню, нагретую до 70 С. В присутствии витамина Е появится красная окраска.

Полученные данные запишите в таблицу 10.

Опыт 3.: Качественный анализ витамина К.

Витамин К обозначают по первой букве слова «коагуляция» - свертывание. Витамин К выпускается в виде препаратов: метинол и викасол.

Витамин К в больших количествах находится в зеленых листьях растений, а именно в крапиве, моркови, в шпинате, салате, капусте. Из источников животного происхождения, особенно, им богата свиная печень. А так же некоторые кишечные бактерии способны синтезировать витамин К.

Витамин К способствует свертыванию крови.

Реактивы: спиртовой раствор викасола 0,1% или спиртовой раствор метинола 0,2%, раствор цистеина 0,025%, раствор гидроксида натрия 10%.

Ход определения: Налить в пробирку 1 мл спиртового раствора викасола (или метинола), добавить 2 капли раствора цистеина. Затем прилить 2 капли раствора гидроксида натрия.

36

37

В присутствии витамина К появится желтое окрашивание.

ВОПРОСЫ ДЛЯ ПОВТОРЕНИЯ.

1.Витамин Е является жирорастворимым или водорастворимым?

2.Назовите источники витамина Е.

3.Для чего необходим витамин Е?

4.Как определить наличие витамина Е?

5.Для чего необходим витамин К? В каких случаях его используют?

6.Как определить наличие витамина К?

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА № 12.

Анализ молока.

Молоко - ценный пищевой продукт, содержащий в своем составе жиры (3,9%), белки (3,4%, из них казеин — 2,9%, альбумин 0,6%, глобулин 0,1%), молочный сахар 4,8%, золу 0,7% и воду 87,2%.

Молоко содержит большое количество важнейших аминокислот, а так же около 30 витаминов. Особенно большое количество в молоке витаминов А и В, а в обогащенном молоке присутствует витамин D.

В молоке помимо того содержится кальций, различные ферменты, иммунные тела.

Основной белок молока — казеин, он собран в глобулы. И если прокисшее молоко подогреть, то в осадок выпадет белый сгусток творога — казеин.

При кипячении молока на стенках сосуда остается белый осадок — это альбумин и глобулин, эти белки свертываются при кипячении.

При удалении всех белков от молока остается зеленоватая жидкость — сыворотка, которая после долгого кипячения загустевает и темнеет. Если эту жидкость, затем, поставить на холод, то через день в ней можно обнаружить светло-желтые кристаллы молочного сахара.

Опыт 1.: Удаление молочного белка.

Реактивы: обезжиренное молоко, раствор уксусной кислоты

37

38

0,1%.

Ход определения: Налить в стакан 15-20 мл обезжиренного молока и добавить несколько капель раствора уксусной кислоты до прекращения образования хлопьев. Выпавший осадок состоит из альбумина, казеина и других белков.

Отфильтруйте полученный осадок. Полученный фильтрат содержит в основном молочный сахар.

Опыт 2.: Анализ белка и углеводов.

Реактивы: выпавший осадок, фильтрат (из предыдущего опыта), раствор гидроксида натрия 10%, раствор сульфата меди

1%.

Ход определения: Пронумеруйте две пробирки. В первую пробирку поместите на кончике шпателя предполагаемый молочный белок, во вторую налейте 2 мл фильтрата.

Добавьте в каждую из пробирок по 2 мл раствора гидроксида натрия, перемешайте. Затем добавьте 1-2 капли раствора сульфата меди, перемешайте.

Если цвет раствора изменится на фиолетовый (розоватофиолетовый), то в таком растворе присутствует белок.

Если при комнатной температуре изменение окраски не происходит, то обе пробирки помещают на водяную баню, без интенсивного кипения.

Опыт 3.: Выделение углеводов.

Реактивы: выпавший осадок, фильтрат, мел (или карбонат магния), этанол, раствор серной кислоты (1:4).

Ход определения: Налейте фильтрат в выпарительную чашку и прокипятите, при этом наблюдается выпадение осадка. Выпавший осадок вновь фильтруют.

Затем жидкость нейтрализуют сухим мелом и раствор снова фильтруют. Далее жидкость помещают в чашку, устанавливая ее на стакан наполовину наполненный водой. Стакан нагревают и упаривают жидкость в чашке до сиропа.

Остаток разбавляют 5 мл спирта, сливают жидкость, а выпавшие кристаллы растворяют в 10 мл воды, затем фильтруют, упаривают до объема 3 мл и добавляют 4 мл спирта. При стоянии выпадают кристаллы лактозы, которые сушат на фильтровальной бумаге.

38

39

ВОПРОСЫ ДЛЯ ПОВТОРЕНИЯ.

1.Из каких основных компонентов состоит молоко?

2.Какие белки входят в состав молока?

3.Как можно определить наличие каждого из белков?

4.Что за углевод, который входит в состав молока?

5.Как определить этот углевод?

6.Есть ли на него качественная реакция?

7.Какие еще важные компоненты содержит молоко?

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА № 13

Определение качества мяса и рыбы. Определение качества мяса.

При разложении белка выделяется сероводород и аммиак, присутствие которых свидетельствует о порче мяса.

Опыт 1.: Определение сероводорода.

Реактивы: кусочек мяса, фильтровальная бумага пропитанная реактивом на сероводород.

Ход определения: Поместить кусочек мяса в стакан, взять пинцетом фильтровальную бумагу, пропитанную реактивом на сероводород и покрыть ей стакан. Если мясо испорчено и в нем присутствует сероводород, то через 10-15 минут на бумаге будет отмечено появление бурого пятна.

Опыт 2.: Определение свежести мяса.

Реактивы: кусочек мяса, дистиллированная вода, раствор метиленовой сини 0,01%.

Ход определения: Поместить мелко изрубленные кусочки мяса в пробирку, залить дистиллированной водой. Пробирку закрыть и сильно встряхнуть, дать отстоятся 30 минут при комнатной температуре.

Прилить в пробирку 0,5 мл метиленовой сини. Нагреть пробирку в стакане с горячей водой до 40-50 С. Если в течении часа происходит обесцвечивание метиленовой сини (полностью или наполовину), то мясо не считается свежим.

Определение качества рыбы.

Несвежая рыба имеет щелочную или сильнокислую реакцию и при её разложении выделяется сероводород.

39