
- •2 Общие указания к методике выполнения и защиты лабораторных работ…...… 5
- •6.1 Количественное определение общего азота по методу Къельдаля.………..29
- •6.2 Определение различных форм азота в молоке и сыре………………………34
- •6.3 Определение белка в молоке по Лоури……………………………………….38
- •1 Основные требования техники безопасности при работе в лабораториях и оказание первой помощи при несчастных случаях
- •2 Общие указания к методике выполнения и защиты лабораторных работ
- •3 Аминокислоты, пептиды и белки
- •3.1 Протеиногенные аминокислоты
- •3.2 Классификация аминокислот
- •Цвиттер-ион
- •3.3 Биологическое значение аминокислот
- •4 Цветные реакции на белки
- •4.1 Биуретовая реакция
- •4.2 Нингидриновая реакция
- •Соон о
- •О о
- •4.3 Ксантопротеиновая реакция
- •4.4 Реакция Адамкевича
- •4.5 Реакция Фоля
- •Соон соон
- •Контрольные вопросы
- •5 Физико-химические свойства белков
- •5.1 Определение изоэлектрической точки белков
- •5.2 Высаливание белков сульфатом аммония
- •5.3 Необратимое осаждение белков
- •5.3.1 Осаждение белков органическими веществами
- •3.3.2 Денатурация белков при нагревании
- •5.3.3 Осаждение белков концентрированными минеральными
- •5.3.4 Осаждение белков органическими кислотами
- •5.3.5 Осаждение белков солями тяжелых металлов
- •Контрольные вопросы
- •5.4 Разделение и очистка белков методом диализа
- •Контрольные вопросы
- •6 Методы определения азота в биологических объектах
- •6.1 Количественное определение общего азота по методу Къельдаля
- •6.2 Определение различных форм азота в молоке и сыре
- •Азотистые соединения сыра
- •Нерастворимые в воде азотистые Растворимые в воде азотистые
- •6.2.1 Метод определения общего количества азота в сыре
- •6.2.2 Метод определения общего количества растворимого азота
- •6.2.3 Метод определения азотосодержащих небелковых соединений
- •6.2.4 Метод определения аминного азота (пептиды, аминокислоты, амиды, аммиак)
- •6.3 Определение белка в молоке по Лоури
- •20 40 60 80 100 120 140 С10-6, г/мл
- •0,002054
- •Контрольные вопросы
- •7 Определение влажности весовым методом
- •7.1 Метод высушивания до постоянной массы
- •7.2 Определение влажности ускоренным методом высушивания
- •7.3 Определение влажности экспрессным методом высушивания
- •Контрольные вопросы
- •8 Список используемых источников
- •Приложение а
- •Значение рК для ионизируемых групп в аминокислотах
- •Приложение б
- •Методики приготовления реактивов
Соон о
аминокислота О
О
Окисленный Восстановленный
нингидрин нингидрин
На II стадии образовавшийся аммиак реагирует с эквимолярными количествами окисленного и восстановленного нингидрина, образуя сине-фиолетовый продукт, интенсивность окраски которого (при 570 нм) пропорциональна количеству аминокислоты:
О О
=N
Н
О о
Ход работы. В одну пробирку наливают 5 капель разбавленного раствора яичного альбумина, во вторую – 5 капель 1 %-ного раствора желатина, в третью – 5 капель 1 %-ного раствора растительного альбумина. В каждую пробирку добавляют по 3 капли 0,5 %-ного раствора нингидрина и нагревают до кипения. Через 2–3 минуты в пробирках появляется розовое, красное, а затем сине-фиолетовое окрашивание.
4.3 Ксантопротеиновая реакция
Принцип метода. При добавлении к раствору белка концентрированной азотной кислоты белок выпадает в осадок, который при нагревании растворяется и жидкость окрашивается в желтый цвет. Эта реакция характерна для ароматических аминокислот (фенилаланина, тирозина и триптофона), которые подвергаются нитрованию:
NО2
НО СН2СНСООН +2 НNО3НО СН2СНСООН
NН2 NО2 NН2 +2Н2О
Тирозин Динитротирозин
Нитропроизводное аминокислот в щелочной среде образуют соли хиноидной структуры, окрашенные в оранжевый цвет. Например:
NО2
NН2 N О О -
|
|
Ход работы. В одну пробирку наливают 5 капель разбавленного раствора яичного альбумина, во вторую – 5 капель 1 %-ного раствора желатина, в третью – 5 капель 1 %-ного раствора растительного альбумина. Затем в пробирки добавляют по 3 капли концентрированной азотной кислоты и нагревают (осторожно!). При нагревании раствор и выпавший белый осадок или муть от свернувшегося белка окрашиваются в ярко-желтый цвет при наличии ароматических аминокислот: в пробирке с желатином появляется едва заметное бледно-желтое окрашивание (обусловленное незначительной примесью других белков). Пробирки охлаждают, после этого в них осторожно добавляют по 10 капель 30 %-ного раствора гидроксида натрия. Выпавший в начале осадок белка растворяется, и жидкость окрашивается в ярко- оранжевый цвет.