Добавил:
Upload Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз: Предмет: Файл:
Биохимия / Белки 1 / MУ_белки_прил.doc
Скачиваний:
146
Добавлен:
09.04.2015
Размер:
395.26 Кб
Скачать

Соон о 

аминокислота  О

О

Окисленный Восстановленный

нингидрин нингидрин

На II стадии образовавшийся аммиак реагирует с эквимолярными количествами окисленного и восстановленного нингидрина, образуя сине-фиолетовый продукт, интенсивность окраски которого (при 570 нм) пропорциональна количеству аминокислоты:

О О

 

=N

Н

 

О о

Ход работы. В одну пробирку наливают 5 капель разбавленного раствора яичного альбумина, во вторую – 5 капель 1 %-ного раствора желатина, в третью – 5 капель 1 %-ного раствора растительного альбумина. В каждую пробирку добавляют по 3 капли 0,5 %-ного раствора нингидрина и нагревают до кипения. Через 2–3 минуты в пробирках появляется розовое, красное, а затем сине-фиолетовое окрашивание.

4.3 Ксантопротеиновая реакция

Принцип метода. При добавлении к раствору белка концентрированной азотной кислоты белок выпадает в осадок, который при нагревании растворяется и жидкость окрашивается в желтый цвет. Эта реакция характерна для ароматических аминокислот (фенилаланина, тирозина и триптофона), которые подвергаются нитрованию:

2

НО СН2СНСООН +2 НNО3НО СН2СНСООН

 

222 +2Н2О

Тирозин Динитротирозин

Нитропроизводное аминокислот в щелочной среде образуют соли хиноидной структуры, окрашенные в оранжевый цвет. Например:

2

Динитротирозин + NH4OH О СН2СНСООН + NН4+ + Н2О

2

N

О О -

Ход работы. В одну пробирку наливают 5 капель разбавленного раствора яичного альбумина, во вторую – 5 капель 1 %-ного раствора желатина, в третью – 5 капель 1 %-ного раствора растительного альбумина. Затем в пробирки добавляют по 3 капли концентрированной азотной кислоты и нагревают (осторожно!). При нагревании раствор и выпавший белый осадок или муть от свернувшегося белка окрашиваются в ярко-желтый цвет при наличии ароматических аминокислот: в пробирке с желатином появляется едва заметное бледно-желтое окрашивание (обусловленное незначительной примесью других белков). Пробирки охлаждают, после этого в них осторожно добавляют по 10 капель 30 %-ного раствора гидроксида натрия. Выпавший в начале осадок белка растворяется, и жидкость окрашивается в ярко- оранжевый цвет.

Соседние файлы в папке Белки 1